HPV-DNA分型检测联合液基细胞学对宫颈癌筛查的意义及临床价值的研究

【摘要】目的 研究HPV-DNA分型检测联合宫颈液基细胞学检查（TCT）对宫颈癌筛查的意义及临床价值。方法 将于我院就诊的564例妇女同时行TCT、PCR荧光检测HPV-DNA和宫颈活检组织学检查，采用膜杂交法检测23个HPV基因型别（低危型：HPV6、11、42、43、45和高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4）和液基细胞学（TCT）作为宫颈癌和癌前病变的筛查。比较TCT对宫颈细胞异常的检出率以及TCT检测联合PCR荧光检测HPV-DNA对HPV感染的检出率，以病理学诊断为标准。结果 PCR荧光法检测HPV-DNA总检出率为21.0%，组织学阳性病例检出率70.9%，组织学阴性病例检出率4.5%，均显著高于TCT，呈极其显著性差异，P<0.01。其中单一型HPV感染中，低危型占34%、高危型占60%、二型和二型以上混合感染占6%。结论HPV基因分型检测是有价值的辅助诊断技术,与细胞学联合,是最佳的宫颈癌筛查的方案，能明显提高诊断的准确性和早发现癌前病变。

【关键词】宫颈肿瘤筛查液基细胞学检查HPV-DNA

【图分类号】R【文献标示码】A【文章编号】1673-9795(2011)04(a)-0000-00

HPV - DNA parting joint fluid cytology for detection base cervical cancer screening the significance and the clinical value of research

LiJianHong 1 MaJianPing 2

(xiangtan first people"s hospital hunan xiangtan 411101)

Abstract: Objective detection of HPV-DNA typing of liquid-based cervical cytology combined (TCT) on the significance of cervical cancer screening and clinical value. Methods will be our hospital 564 cases of women simultaneously TCT, PCR fluorescent detection of cervical HPV-DNA and biopsy examination, was detected by membrane hybridization HPV genotypes 23 (low risk type: HPV6, 11,42,43 , 45, and high-risk types: HPV16, 18,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73,83, MM4) and liquid-based cytology (TCT) As screening for cervical cancer and precancerous lesions. Comparison of TCT on the detection rate of abnormal cervical cells and the TCT joint PCR detection of HPV-DNA fluorescence detection rate of HPV infection, the pathological diagnosis as the gold standard. Results PCR detection of HPV-DNA fluorescence total detection rate of 21.0%, histology-positive case detection rate of 70.9%, case detection rate of histologically negative 4.5%, respectively, significantly higher than the TCT, was very significant difference, P < 0.01. One single type HPV infection, accounting for 34% of low risk, high risk 60%, and type II mixed infections accounted for more than 6%. Conclusions HPV genotyping is a valuable adjunct to diagnostic techniques, combined with cytology, is the best cervical cancer screening program can significantly improve the diagnostic accuracy and early detection of precancerous lesions. Key words: cervical cancer; screening; liquid-based cytology; HPV-DNA

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一，位于女性恶性肿瘤的第2位，严重威胁着女性的生命与健康。宫颈癌的发生和发展是一个长期、慢性的病理改变，是由宫颈不典型增生(CIN1→CIN2→CIN3)→原位癌→浸润癌的连续发展过程。由宫颈不典型增生发展为原位癌的时间约为10年，筛查是早期发现和防治宫颈癌的重要途径[1]。研究证实：几乎所有宫颈癌都是由HPV病毒感染引发，没有HPV感染就可以不罹患宫颈癌，1996年，（WTO)将HPV确认为引发宫颈癌的根本性致病因子[4]。近年来备受关注的宫颈癌筛查方法是宫颈液基细胞学(Liquid-based Cytologic test，TCT)，同时，HPV与宫颈癌关系密切，研究发现99％以上的宫颈癌有HPV感染，HPV检测能改进目前宫颈癌细胞学筛查的有效性。本文旨在探讨HPV-DNA分型检测联合宫颈液基细胞学检查对宫颈癌筛查的意义及临床价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2009年11月至2010年7月就我院妇科门诊慢性宫颈炎或阴道异常出血、流液的患者564例，进行宫颈癌筛查，该组患者均为已婚妇女，年龄23～55岁，平均年龄31.5岁，均为无子宫切除、无盆腔放射史，目前无妊娠，无子宫颈手术史者。同时进行宫颈液基细胞学检查及HPV-DNA分型检测。

1.2 样本的采集与处理

受检者取膀胱截石位，暴露子宫颈，窥阴器暴露宫颈后，将专用宫颈细胞采集刷伸入宫颈管内，按顺／逆时针方向旋转3～5圈取出，迅速将收集的细胞保存在专用的装有固定液Thinprep保存液的收集管中，在标本瓶上写上姓名、年龄，并贴上条形码。标本在人工控制下用Thinprep 2000系统装置自动处理，用液基细胞制片仪制片，每例制成直径2cm的薄层细胞涂片，95%的酒精固定，进行巴氏染色做细胞学诊断，封片，阅片并发出诊断报告。

1.3 检测方法

1.3.1 液基细胞学检查

采用新柏全自动超薄液基细胞学检测技术(thinprep cytology test，TCT)。按照说明书进行TCT检测。采用2001年国际癌症协会推荐的TBS细胞分类诊断系统，包括对标本的满意度评估，不满意标本重新取材，满意标本分级为：①阴性，无上皮内病变或恶性肿瘤；②阳性。按级别由低至高分为不明意义非典型鳞状／腺细胞(ASC／AGC)、鳞状上皮内高度病变(HSIL)、鳞状上皮内低度病变(LSIL)、鳞状细胞癌(SCC)及腺癌(AC)。为统一细胞学与组织学的诊断术语。根据TBS系统ISIL即CINI，HSIL包括CINⅡ和CINⅢ。

1.3.2 HPV-DNA检测

将剩余的Thinprep保存液中的标本离心，取沉淀物，用PCR荧光法检测HPV DNA，试剂盒为广东凯普生物化学有限公司生产、医用核酸分子快速杂交仪（HHM-2.HHM-21)为广东凯普生物化学有限公司生产。检测23个HPV基因型别（低危型：HPV6、11、42、43、45和高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4）和液基细胞学（TCT）作为宫颈癌和癌前病变的筛查。

用阴道镜观察宫颈情况，于镜下病变区用活检钳钳取少量宫颈组织送组织学检查。组织学阳性诊断包括CIN1、CIN2、CIN3以及SCC。根据细胞异型性的程度和范围依次分为良性细胞改变(BCC)、宫颈上皮内瘤变(CIN1、CIN2、CIN3)和鳞状细胞癌(SCC)。

1.4 统计学处理

采用SPSSl1.0统计软件。记数资料采用均数±标准差表示，应用2 检验，计量资料采用两样本t检验，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 宫颈液基细胞学(TCT)检查结果

TCT诊断阳性118例，阳性率21.0%，组织学诊断阳性率25.0%，两者比较差异不显著(2 =1.69，P>0.05)。以组织学诊断为标准，TCT对各级异常细胞的诊断符合率分别为：LSIL 78.6%(81／103)、HSIL 93.3% (127／136) 和SCC 100%(9／9)，总的诊断符合率为87.5%。

2.2 HPV基因分型检出率

在所有检出单一型HPV感染中，低危型占34%、高危型占60%、二型和二型以上混合感染占6%。

2.3 两种方法检测HPV的比较

表1 PCR与TCT方法检测HPV的比较

由表1可知，PCR荧光法检测HPV-DNA的总检出率和组织学阳性病例检出率均显著高于TCT，呈极其显著性差异，P<0.01。其中TCT检出HPV感染的140例均为组织学阳性病例，而PCR荧光法在组织学阴性的564例中检出34例有HPV感染(6.02%)，组织学阳性者HPV的感染率70.9%高于组织学阴性者，呈极其显著性差异（2 =250.7，P<0.01）。

3 讨论

宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤，我国每年新增的宫颈癌病例约13.15万，且其发病年龄日趋年轻化。定期进行宫颈癌筛查，及早发现和治疗早期宫颈癌及癌前病变，是阻断宫颈浸润癌发展、降低宫颈癌发病率和死亡率的重要手段。若能早发现并及时治疗早期宫颈癌，其治愈率达90%以上[2]。本文研究结果表明，PCR荧光法检测HPV-DNA总检出率为21.0%，组织学阳性病例检出率70.9%，组织学阴性病例检出率4.5%，均显著高于TCT，呈极其显著性差异，P<0.01。HPV的诊断方法可通过细胞学检查或病毒学检测，采用TCT标本进行检测，适用于HPV感染任何时期的诊断，且能避免了患者须取多份标本的麻烦和标本间的误差。HPV-DNA分型检测联合TCT，除了TCT外应将HPV检测作为宫颈癌筛查的常规必查内容，这样可以最大程度地发现宫颈异常细胞的同时，及时发现宫颈癌的诱因，不仅可以分辨出现严重病变的妇女，还可以分辨出将来有可能患病的妇女，使针对该病的高危妇女随访成为可能[3]。这样，可以减少HPV阴性女性的就诊率，在细胞学正常及不典型增生人群中，对预警宫颈细胞癌变倾向，及时发现和预防、治疗早期宫颈癌均有较大意义。HPV-DNA分型检测联合TCT是筛查早期宫颈病变的最佳选择，值得在临床广泛推广应用。

参考文献

[1] Yang L，Parkin DM，LI LD，et a1．Estimation and projection of the rational profile of cancer mortality in China：1991—2005[J]．Br J Cancer．2008，90(11)：2157-2166．

[2] 郎景和．迎接子宫颈癌预防的全球挑战与机遇[J]．中华妇产科学杂志．2002，50(3)：8-10．

[3] 刘军，罗淑贞，卢义生等．液基细胞学应用于宫颈癌筛查的研究[J]．中国实用妇科与产科杂志，2004，20(9)：553-554．

[4] 郎景和.子宫颈病变防治的几个问题[j].世界医学杂志，2004，8（11）：1-3.

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