门诊宫颈拭子HPV检测与早期宫颈癌防治关系研究

摘要：目的 研究我院妇科门诊拭子检测人乳头瘤病毒亚型感染的情况，探讨 HPV DNA检测在防治早期宫颈癌中的意义。方法 对587例妇科门诊患者进行HPV基因分型检测。结果 587例患者中，HPV感染者156例，感染率为26.58%。患者中高危型 HPV （ 52、16、33、18、58、39、51、59、35、56、68） 112例， 占感染总人次的 71.79%； 低危型 HPV （6、11） 35例， 占感染总人次的22.44%； 中国人群常见型HPV （ 53、66 cp8304 ） 9例，占感染总人次的5.77 %。多重感染患者5例，占HPV感染者的 3.21%。结论 利用宫颈拭子进行HPV-DNA检测HPV基因分型，有助于了解本地区HPV感染亚型的分布，有利于对 HPV感染的诊断和宫颈癌的防治，可作为宫颈癌筛查的手段。

关键词：人乳头瘤病毒；宫颈肿瘤；感染；防治

2002年全球宫颈癌发患者数约有500000 人，死亡人数约280000人[1-2]，可见宫颈癌是威胁妇女生命健康的最常见的疾病之一，近几年呈增高趋势。在我国宫颈癌也是最常见的女性生殖道恶性肿瘤之一。大量流行病学、分子生物学研究表明95% 宫颈癌发生与人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染有关，HPV 感染已被证明是引起宫颈癌及癌前病变的必要因素[3-4]。 目前已经确定的HPV亚型大约有120余种，能够感染妇女生殖道的有40种亚型，而与肿瘤相关的约20种，HPV感染可引起肛门癌、阴茎癌、宫颈癌等[5]。本文将对587例在我院妇科门诊的女性进行宫颈拭子HPV筛查及分型检测，了解本地区妇女HPV感染情况，为HPV感染的防治及宫颈癌的早期诊断提供依据。现将我们的调查研究报道如下：

1 资料与方法

1.1一般资料 2012年3月～2013年9月587例在我院门诊就诊的年龄大于30岁以上进行宫颈拭子HPV-DNA及其亚型检测的妇女，20～75岁，中位年龄39.2岁。

1.2 主要仪器 核酸扩增荧光分析仪（美国AB17000型）；医用核酸分子快速杂交仪；试剂盒由潮州凯普生物化学有限公司提供。

1.3采集宫颈脱落细胞 将专用宫颈刷放置于宫颈口，轻轻搓动并使其顺时针旋转5圈，慢慢取出宫颈刷，将其放入专用取样管内管内有细胞保存液，4℃保存待检。

1.4 HPV-DNA提取及扩增 严格按照DNA提取试剂盒操作步骤提取，HPV-DNA扩增按照试剂盒说明书扩增程序进行PCR扩增反应。

1.5杂交显色及结果判断

PCR产物预热至45℃后，取20μL 加入0.5ml已预热至45℃的杂交液中，混匀后加在薄膜上，导流杂交在医用核酸分子快速杂交仪中进行。杂交完成后，进行显色，1h内分析结果。阳性点为清晰可见的蓝色园点，阳性点的HPV病毒的类型根据膜条HPV的分型判断。

1.6统计学处理 采用SPASS 17.0 统计学软件进行统计学分析处理，以α=0.05为检验水准。

2 结果

2.1一般情况 587例女性中，HPV感染阳性者为156例，总阳性率达26.58%，其中112例为HPV高危型感染（71.79%），35例HPV低危型感染（22.44%），9例为中国人群HPV常见型感染（5.77%），有5例（3.21%）为混合感染且均为高危型混合感染。

2.2 HPV 感染年龄分布 587例HPV筛查的女性中，在21～35，36～45，46～55，>56例年龄区间的阳性率分别为19.44%，26.29%，28.81%，32.65%；感染高峰在46～55，>56这两个年龄段。但各年龄组间HPV感染无统计学差异（P>0.05），见表1。

2.3 HPV亚型分布 本次研究中HPV各亚型分布见表2。HPV52型（16.7%），HPV6型（16.7%），HPV16型（12.8%），HPV33型（10.9%）分别占据了HPV各亚型感染分布的前4位。

3 讨论

HPV是一类具有相同结构的异型病毒，主要侵犯皮肤及黏膜鳞状上皮的小双股环状 DNA病毒。在分子生物学和流行病学不断发展的时代，医学界对人类乳头瘤状病毒 （ hum an papillo m au irus，H PV） 感染及下生殖道系列疾病的关系研究不断深入，学者们发现人类乳头瘤病毒感染和宫颈癌有着密切关联性。国际癌症研究中心 （ I ARC ） （ 1995） 年明确提出 H PV 感染是诱发宫颈癌的主要危险因素之一。潜伏感染期、亚临床感染期、临床症状期和相关的肿瘤期是HPV感染过程常见分期。 HPV阳性妇女是否进展到宫颈上皮内高度病变和癌症，与HPV的型别有很大联系。大部分学者认为HPV高危型持续感染是子宫颈癌发生必要条件[6]。Cuz i ck等研究报道，在印度宫颈癌高发区，高危型 HPV感染率为 7%～13%%[7]。

本研究中选取妇科门诊进行HPV筛查的女性作为研究对象，年龄均在20岁以上，并进行基因分型检测。587位女性中，HPV感染阳性者为156例，总阳性率达26.58%，其中112例为HPV高危型感染（71.79%），35例HPV低危型感染（22.44%），9例为中国人群HPV常见型感染，有5例（3.21%）为混合感染且均为高危型混个感染，与常见报道相一致。 HPV52型（16.7%），HPV6型（16.7%），HPV16型（12.8%），HPV33型（10.9%）分别占据了HPV各亚型感染分布的前4位。从年龄组间构成比看，感染高峰在46～55，>56这两个年龄段。但各年龄组间HPV感染无统计学差异（P>0.05）。据文献报道，全世界高危型感染主要以HPV-16，18亚型为主，其次为HPV45，31，33亚型[8]。但本次研究与此报道略有出入。本研究中，HPV高危型患者其亚型感染比例由高到低依次为 HPV：52、16、33、18、58、39、51、55、59、35、56、68，HPV52型成为第一亚型，而HPV16成为高危型的的第二亚型，HPV33型则为第三亚型，我们分析原因，这可能与地理分布差异及年龄段的选取有关。因此，笔者认为在本地区应着力开展HPV52、16、33亚型的普查研究，使其成为宫颈癌防治的早期预防措施。此外在我们的研究中，156例阳性感染者混合感染占3.21%，且均为高危亚型，但是未见四重以上感染。说明在本地区人群中妇女HPV多重感染所占比例较小。

本研究患者的年龄平均为39.5 岁，在21～35，36～45，46～55，>56各年龄区间的阳性率分别为19.44%，26.29%，28.81%，32.65%；感染高峰在46～55，>56这两个年龄段。但各年龄组间HPV感染无统计学差异（P>0.05）。说明各年龄组间，感染HPV 病毒的概率没有太大差别。研究认为，性活跃年轻妇女HPV感染率高，但目前认为这种感染是一过性的，这些HPV感染者大部分会自然消退， 仅 5.0%～10%发展为持续感染[9]。有前瞻性研究发现，宫颈HPV 感染者宫颈感染HPV1 6/18 型者在1 年时间内有1/3 将会发展成为宫颈上皮内瘤样病变（CIN），而其中约有15%将可能转变为宫颈癌[10]。

人乳头状瘤病毒感染与子宫颈病变发展有密切关系，对宫颈脱落细胞进行 HPV 检测，了解其感染状态和亚型，从而积极地治疗宫颈高危型HPV 感染，对预防宫颈癌变具有重要的意义。

参考文献：

[1]Parkin DM，Bray F，Ferlay J，et al.Global Cancer statistics，2002[J]. CA Cancer J Clin，2005，55（2）：74-108.

[2]Kamangar F，Dores GM，Anderson WF.Patterns of cancer incidence，mortality，and prevalence across five continents：defining priorities to reduce cancer disparities in different geographic regions of the world[J].J Clin Oncol，2006，24（14）：2137-2150.

[3]穆雅琴，趙富玺，郭俊成，等.宫颈癌凋亡抑制因子表达与 HPV-（16/18）感染相关性[J].中国公共卫生，2006，22（12）：1416-1418.

[4]李明成，张晓英，郑华.子宫颈糜烂与生殖道人乳头瘤病毒感染关系[J].中国公共卫生，2007，23（8）：951-952.

[5]田永强，朱中元.以 PCR为基础的 HPV检测及其在宫颈癌筛查和治疗中的价值 [J].中国热带医学，2008，8（3）：419-4211.

[6] Roden R，Wu T C.H ow wi ll HPV vaccines affect cervica cancer[J]. Nature Rev，2006，（6）：753-763.

[7]Cuzick J，A rbyn M， Sankaranarayanan R，et al.Over view of human papilloma virus-based and other novel op ti ons for cervical cancer Screening in devel op ed and developing countries[J].Vaccine，2008，26（S）：K29-K41.

[8]Munoz N，BoschF X，de Sanjos S，et al.Epidemiologic classification of human papillomavirus types associated with cervical cancer[J].N Engl J Med，2003，348（6）：518-527.

[9]彭秀红，毛玲芝，邓群娣.人乳头瘤病毒-DNA分型检测在年轻妇女宫颈病变诊断中的价值[J].中国生育健康杂志，2009，20（2）：92-95.

[10]徐成康，梅卓贤.宫颈人乳头状瘤病毒感染的筛查及其意义[J].中山医科大学学报，1998，19：22-31.

编辑/王敏

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