人乳头瘤病毒E6/E7,mRNA检测在30岁以下年轻女性宫颈疾病诊治中的应用探讨

【摘要】 目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）E6/E7 mRNA检测在30岁以下年轻女性宫颈疾病诊治中的应用。方法：选取2015年5月-2017年1月就诊于本院行细胞学检查发现的无明确诊断意义的鳞状上皮细胞病变（ASCUSAIL）患者100例，均为30岁以下年轻女性。按照随机数字表法将其分为对照组和研究组，各50例。对照组予传统HPV DNA分型检测，研究组直接进行HPV E6/E7 mRNA检测。比较两组病变预测准确度、特异度、阴道转诊率、患者满意度。结果：HPV E6/E7 mRNA检测诊断CINⅡ+准确度、特异度为72.00%、43.75%，均高于HPV DNA检测的64.00%、21.05%，比较差异均有统计学意义（P<0.05）；HPV E6/E7 mRNA检测阴道转诊率为76.0%，低于HPV DNA检测的86.0%（P<0.05）；HPV E6/E7 mRNA检测患者满意度为92.0%，高于HPV DNA检测的76.0%（P<0.05）。结论：HPV E6/E7 mRNA检测诊断CINⅡ+较HPV DNA检测准确率高、阴道转诊率低、患者满意度高，对宫颈疾病的诊治有较好应用价值。

【关键词】 人乳头瘤病毒； 宫颈内瘤变； HPV E6/E7 mRNA检测； HPV DNA检测

【Abstract】 Objective：To investigate the application of human papillomavirus（HPV） E6/E7 mRNA in diagnosis and treatment of cervical diseases in young women under 30 years old.Method：A total of 100 ASCUSAIL patients who had been treated for cytological examination in our hospital from May 2015 to January 2017 were selected，they were young women under 30 years old.According to the random number table method，they were divided into control group and study group，50 cases in each group.The control group was given conventional HPV DNA typing test，and study group was directly tested by HPV E6/E7 mRNA.The accuracy，specificity，vaginal referral rate and patient satisfaction were compared between two groups.Result：The accuracy and specificity of CINⅡ+ were 72.00% and 43.75% in the diagnosis of HPV E6/E7 mRNA，which were all higher than 64.00% and 21.05% of HPV DNA（P<0.05）.The vaginal referral rate in HPV E6/E7 mRNA was 76.0% lower than 86.0% of HPV DNA（P<0.05）.The patient satisfaction with HPV E6/E7 mRNA was 92.0% higher than 76.0% of HPV DNA（P<0.05）.Conclusion：Compared with HPV DNA detection，HPV E6/E7 mRNA detection has high accuracy，low vaginal referral rate and high patient satisfaction，has good application value for the diagnosis and treatment of cervix disease.

【Key words】 Human papillomavirus； Cervical intracervical tumorigenesis； HPV E6/E7 mRNA detection； HPV DNA detection

First-author’s address：Dalang Hospital of Dongguan，Dongguan 523770，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.15.032

人乳头瘤病毒（HPV）感染是宫颈癌发展的主要风险因素，几乎100%的宫颈癌合并HPV感染[1]，但是感染了HPV并不一定患宫颈癌，尤其是年轻女性，大多数感染是一过性的或是无症状的[2]。对于宫颈癌的筛查，传统细胞学筛查虽然仍为主要手段但筛查的特异性和准确性及预测病变的发展趋势都有其局限性[3]。HPV E6/E7 mRNA檢测比常规HPV DNA分型检查更准确，更可预测30岁以下年轻女性宫颈病变进展及其转归，以缓解年轻女性对宫颈HPV感染的心理恐惧并可预防因宫颈HPV感染所导致的过度治疗[4]，本研究即重在探讨HPV E6/E7 mRNA检测在30岁以下年轻女性宫颈疾病诊治中的应用[3]。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年5月-2017年1月就诊于本院行细胞学检查发现的无明确诊断意义的鳞状上皮细胞病变（ASCUSAIL）患者100例，均为30岁以下年轻女性。纳入标准：无宫颈手术史；无宫颈物理治疗史；无盆腔放射史。排除标准：妊娠；合并严重的全身疾病；有精神疾患无法配合治疗者。按照随机数字表法将其分为对照组和研究组，各50例。所有患者均知情同意并签署知情同意书，该研究已经医院伦理学委员会批准。

1.2 方法 对照组予传统HPV DNA分型，研究组直接做HPV E6/E7 mRNA检测。兩组阳性者行阴道镜检+活检，子宫颈上皮非典型增生（CIN）Ⅱ级以下的再定期复查TCT及HPV DNA检测继续随访，CINⅡ级以上的再行相关治疗。若E6/E7 mRNA检测转阴，转为6～12个月复查TCT，若E6/E7 mRNA检测持续阳性但TCT检测细胞学分级无升级，则选择适宜治疗[5-6]。（1）TCT：采用TCT专用毛刷进行取材，将采集的细胞涮洗于TCT取样品中，制成薄片，经巴氏染色后镜检。（2）HPV DNA检测：采用PCR反向点杂交技术，仪器及试剂盒均购自杭州新捷生物科技有限公司，使用专用毛刷取材后，涮洗于HPV专用取样瓶中，并按照试剂盒操作。（3）组织病理学检查：宫颈组织学诊断分为：正常、炎症、宫颈上皮内瘤变，浸润癌，对于病理检查结果≥CINⅠ级的患者则行宫颈电环切术，获取进一步准确病理诊断，不同部位级别不同时则以病理级别高的为准。（4）HPV E6/E7 mRNA检测：采用购自河南中美合资科蒂亚生物技术有限公司的仪器及试剂盒，严格按照试剂盒说明进行操作，标本采用冷光仪进行检测，检测结果经计算机相关处理后转换为拷贝数，若拷贝数≥1 copy/mL则为阳性。

1.3 观察指标及判定标准 比较两组对CINⅡ+的诊断价值、阴道转诊率（为患者行HPV E6/E7 mRNA或HPV DNA检测结果为阳性后行阴道镜检查与该组总例数的比值）、满意度（患者根据检查效果、检查效率及对检查的信任度对该检查综合评定，评定等级为满意、一般、不满意，满意度为评定等级为满意例数占该组总例数的比值）。

1.4 统计学处理 使用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基线资料比较 对照组年龄21～29岁，平均（25.0±1.4）岁；有性生活史40例；1周内有阴道冲洗及用药0例。研究组年龄21～28岁，平均（25.0±1.6）岁；有性生活史42例，1周内有阴道冲洗及用药0例。两组患者在年龄、性生活史、1周内有阴道冲洗及用药方面比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA检测CINⅡ+的诊断结果与诊断价值 HPV E6/E7 mRNA检测诊断CINⅡ+准确度、特异度为72.00%、43.75%，均高于HPV DNA检测的64.00%、21.05%，比较差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1～3。

2.3 HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA检测阴道转诊率、满意度比较 HPV E6/E7 mRNA检测阴道转诊率为76.0%（38/50），低于HPV DNA检测的86.0%（43/50）（P<0.05）；HPV E6/E7 mRNA检测患者满意度为92.0%（46/50），高于HPV DNA检测的76.0%（38/50）（P<0.05）。

3 讨论

子宫颈癌习称宫颈癌，是最常见的妇科恶性肿瘤，常见的病理类型有鳞状细胞浸润癌、腺癌、腺鳞癌，在病变的发展过程中，可能出现以下几种症状：阴道接触性出血[7-8]、阴道排液、晚期据癌灶累及的范围不同还可出现不同的继发症状。宫颈癌危害重大，严重危及患者生命健康[9-10]。

随着中国经济发展，社会环境日趋复杂，年轻女性的性保护意识薄弱，早性史、早育史、多个性伴侣这些因素均是HPV感染高危因素，目前宫颈癌的发生已明确与HPV感染有关，而且年轻化趋势已日益明显，对于宫颈癌前病变，大多数都有三种发展趋势：进展、保持、消退[11-12]，即使高危型HPV感染，约有60%仍为一过性，不致癌，宫颈疾病筛查指南指出年轻女性的宫颈癌筛查目前主要是细胞学检查[13]。但细胞学不能很好地预测病变的发展趋势，且筛查的敏感性和特异性有一定局限，HPV感染后的一过性和不致病性尤其在30岁以下女性中尤为突出，虽然30岁以下女性HPV感染率高，但因为该人群有较强的免疫力等原因，其自然清除率也同样高，即使有一定的病变，也可以自然清除，所以中外指南不建议HPV用于30岁以下年轻女性的宫颈癌筛查[14-15]。故认为宫颈癌的有效筛查及癌前病变的精准诊治需要一种特异强、阳性预测值好的检测方法[16]。HPV E6/E7 mRNA是一种特异性物质，HPV早期编码区中E6、E7基因是病毒癌基因，一般情况下不会表达，但是若病毒DNA整合进入宿主细胞DNA，E6、E7基因则将高水平表达，且不受控制，从而引起宫颈癌细胞恶化[17-18]。E6、E7基因的转录产物E6/E7 mRNA的水平可以反映癌基因活性，进行E6/E7 mRNA检测，则可避免反复进行HPV检测，且可以判断HR-HPV是否反复感染。HPV E6/E7 mRNA检测具有较好的特异性和阳性预测值，认为只有HPV的感染存在持续性时，病毒基因和人类基因才会发生整合，导致E6/E7基因激活，以及大量mRNA的转录，从而导致大量E6/E7癌蛋白的表达，进一步导致细胞癌变的风险增大[19]，故只有HPV E6/E7 mRNA检测阳性才有必要行阴道镜转诊及活检，并根据结果指导诊治，有效避免过度治疗、漏诊等，同时降低阴道镜转诊率，节省了医疗资源，减轻了患者心理及经济压力，减少过度医疗对该人群生殖健康的影响[20]。

本研究结果显示，HPV E6/E7 mRNA检测诊断CINⅡ+准确度、特异度为72.00%、43.75%，均高于HPV DNA检测的64.00%、21.05%，比较差异均有统计学意义（P<0.05）；HPV E6/E7 mRNA检测阴道转诊率为76.0%，低于HPV DNA检测的86.0%（P<0.05）；HPV E6/E7 mRNA检测患者满意度为92.0%，高于HPV DNA检测的76.0%（P<0.05）。故HPV E6/E7 mRNA检测因其较好的特异性和准确度满足当下精准医学的需要，在未来相关检测发展中有相当大的潜力，也将因其在宫颈癌筛查及宫颈疾病诊治中的重要作用为30岁以下年轻患者带来福音。

综上所述，HPV E6/E7 mRNA检测诊断CINⅡ+较HPV DNA檢测准确率高、阴道转诊率低、患者满意度高，对宫颈疾病的诊治有较好应用价值。

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