使用TripleTOF4600进行未知物筛查

AB SCIEX的三重四极杆串接高分辨质谱TripleTOF4600，以其可以长期稳定高效提供高质量精度数据的特性，成为越来越多食品安全和环境检测实验室的主力质谱机型。同时基于对高分辨质谱筛查流程的理解，AB SCIEX又推了出全新的MasterView软件，助力检验人员可以更轻松地对管理数据进行未知物筛查。本文通过分享最近实验的一些数据，对AB SCIEX的最新检测流程进行介绍，以期对从事未知物筛查的实验人员有所帮助。

简 介

液质联用是检测食品中药物残留以及污染物的一种非常有效的分析手段。在实际检测中，多重反应监测技术（MRM）的高选择性和灵敏度，可以使三重四极杆质谱在一次检测中进行数百种目标农残污染物的定量。

如今包括三重四极杆线性离子阱和三重四极杆飞行时间质谱在内的组合质谱，使目标化合物或者非目标化合物的筛查成为了可能。不过，全扫描总离子流图的信息太多，如果要分辨出化学成分和基质，就需要很强的软件系统去分析海量的高质量精度质谱图。

TOF所监测到的一级和二级高分辨质谱数据可以被用来鉴定和定量食品中的药残。新的鉴定流程可以通过样品与添加最大残留检量（MRL）的简单比较进行定量。而定性流程则是建立在保留时间、准分子离子峰的精确质量、同位素丰度比例以及MS/MS二级离子库检索的基础上的。这种全方位离子指纹谱图信息可以帮助我们分辨包括同分异构体在内的多种干扰物质，可以显著降低假阳性的可能。

同时，在进行非目标化合物分析的时候，MasterView软件可以根据找到的色谱质谱信息，进行包括主成分分析在内的统计分析得到差异的提取离子流图。再利用质谱信息与ChemSpider信息比，来对未知化合物进行鉴定。

实验方法

韭菜和梨的样品来自于超市；

使用EN 15662/2007指导原则QuEChERS方法进行处理。样品使用含有千分之一甲酸的乙腈/水（80/20）溶液进行提取；

处理后的样品提取液进行5～20倍的稀释，以降低基质效应；

UHPLC使用Shimadzu UFLCXR系统以及Restek Ultra Aqueous C18（100×2.1mm）3μm色谱柱；

流动相为含有1 0 m o l/ L甲酸铵的水及甲醇组成的梯度，流速为0.5mL/min；

质谱为配有DuoSprayTM离子源的AB SCIEX TripleTOF？4600系统；

使用CDS自动校正；

使用信息依赖性扫描（IDA）进行设置：母离子范围为10～1000Da，子离子设置为20组（由于需要检测的化合物数量众多，如日本统一标准需要监测6万余种化合物。为了保证离子的二级扫描不受共流出的影响建议子离子扫描设置不能少于20组），范围为50～1000Da（100ms），碰撞能量为35±15V的分散碰撞能量（CES）；

开启动态背景扣除（DBS）功能，以保证IDA的覆盖率；

MasterView版本为1.0；

结果及讨论

按照S A N C O等欧盟法规的要求，筛查工作需要大于20000的分辨率（FWHM），并且保持质量偏差小于5ppm。TripleTOF？4600系统可以提供高于35000的分辨率并将质量偏差控制在2ppm以内（无论是一级还是二级质谱）。其生成的提取离子流信息可以将基质成分与真正污染物分离，通过高分辨率以及高质量精确度的质谱信息可以计算其分子式组成，然后通过二级质谱图与谱库相匹配，进行验证。目前为止，高分辨谱库已经涵盖了2500余种化合物，包括农残、毒素、药物、兽药和滥用药物。这些谱库不只包含二级谱库，同时包含了保留时间、同位素峰度比例等信息。软件会通过信号灯的方式进行确认。如图1所示。

结果表明，在韭菜和梨的基质中的44种农药中，43种可以被正确筛查到。其中未找到化合物为乙氧喹，未找到的原因是QuEChERS方法对乙氧喹的回收率很低。实验中所有的质量偏差-1.7～2.1 ppm（正离子模式）和-0.7～2.4ppm（负离子模式）。

对于未知化合物，还可以使用二级质谱图与理论碎片离子进行匹配，如图2所示。由于采用了同位素丰度比例以及子离子预测手段，目标分子式的范围大大缩小，如图3所示。

所以，使用本筛查方法可以帮助实验人员将未知物筛查工作流程化、日常化。可以大大节省实验人员的时间，并有效降低基质引起的干扰。

总 结

将筛查工作应用到日常监测，需要注意的关键流程如下：

（1）使用QuEChERS进行处理后要注意基质效应的影响；

（2）为保证在大量共流出的情况下，保证足够的子离子信息，需要不少于20次的二级离子扫描；

（3）要对包括保留时间、同位素丰度比例，以及母离子和子离子精确质量在内的信息进行确认。

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