人乳头瘤病毒—DNA检测联合细胞学检查在宫颈癌病变筛查中的应用价值研究

报告如下。

1资料与方法

11一般资料

采用随机抽样法随机抽取2012年1月至2014年1月期间我院妇科门诊接受的381例患者。年龄为18～68岁，平均年龄为（378±113）岁。所有患者均未进行子宫切除手术，就诊时均处于非妊娠状态，对所有患者进行TCT和HPV检查，月经干净3d后进行检查，且检查前24h没有任何性行为，并且停止用药和阴道冲洗3d。在两种检查方法下均表现异常的患者需要进行阴道镜取材活检。纳入标准：（1）年龄≥18岁的患者；（2）已经签署知情书并自愿参加本项研究者。排除标准：（1）合并多种急慢性疾病或免疫系统疾病者；（2）严重精神疾病患者。

12方法

121HPV-DNA检测①取材：获取HPV-DNA标本，暴露宫颈后将宫颈表面的分泌物拭去，将专用宫颈刷深入宫颈外口轻压并按照顺时针的方向旋转3～4周后，将获取的足量的宫颈脱落上皮细胞置于保存液中并存放在-20℃的环境下，于1周内进行检测。②提取DNA：充分振荡混匀宫颈细胞保存液，取出800μL的保存液以14000r/min的速率离心5min后扔掉上清液后提取标本DNA。③PCR扩增：取出1μL的样品进行PCR扩增，然后采用HPV通用引物进行PCR反应。④杂交和显色：在95℃下使产物扩增5min，迅速放入冰浴中3min后取出05μL的样品溶液加入到500μL的杂交液中，于杂交膜上反应10min后加入封阻液并反应5min，使用酶标液冲洗2次，加入显色剂进行显色。⑤肉眼观察检测结果，每次杂交试验均设置阳性和阴性对照。蓝紫色圆点为阳性，多个圆点为多重感染，根据杂交膜探针的分布位置，对HPV亚型的阳性点做出判断。

122TCT检查使用TCT新柏式技术进行检测，利用ThinPrep2000制作薄层细胞片，阳性结果报告包括鳞状上皮细胞高度病变（HSIL）为高危型、鳞状上皮细胞低度病变（LSIL）为低危型、宫颈鳞癌（SCC）。阴性结果为未见恶性病变（NILM）和上皮内瘤变。

123病理活检若HPV-DNA检测和TCT检查结果均为阳性，则分为CC、上皮内瘤样病变（CIN）（CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ）、宫颈炎，其中CINⅡ、Ⅲ为一组。根据宫颈是否发生病变和病变的程度分为4组：LSIL（包括CINⅠ）、NILM、SCC、HSIL（包括CIN Ⅱ、Ⅲ）。

13统计学方法

应用SPSS190软件对数据结果进行统计学分析，计数资料以频数表示，比较采用χ2检验。以P<005差异具有统计学意义。

2结果

21HPV感染与年龄的关系

研究结果显示，381例患者中共检测出118例HPV阳性患者，阳性率为309%。将381例患者分为5个年龄组，其中18～28岁年龄组的HPV阳性率最高，为440%。见表1。

表1HPV感染与年龄的关系年龄分组例数

（n）HPV阳性

例数（n）HPV阳性率

（%）18～27502244028～371083633338～471223931948～57771519458～68245208

22TCT检查各级病变中HPV检测的结果

研究结果显示，118例HPV阳性患者经检测共62例TCT阳性患者，符合率为525%，说明在宫颈病变中，HPV检测的敏感性显著高于TCT。TCT检查阳性组和NLM组相比，高危型HPV和HPV检出率的差异具有统计学意义（P<005）。见表2。

23HPV不同亚型感染与宫颈活检中不同级别宫颈病变的关系研究结果显示，对TCT检查和HPV检测同时为阳性的62例标本进行宫颈病理活检。在各级别宫颈病变中高危型HPV与低危型HPV感染相比差异具有统计学意义（P<005）。随着宫颈病变级别的提高单一HPV亚型感染呈上升趋势，与多种HPV亚型感染相比差异具有统计学意义（P<005）。见表3。

24TCT阳性与病理活检结果比较

研究结果显示，TCT检查阳性的62例患者，与最终组织活检结果对照，TCT检查LSIL诊断符合率为729%，HSIL的符合率为833%，SCC的符合率为1000%。这说明在TCT检查阳性结果的基础上采用病理活检的最后定性，联合应用后能够显著提高对宫颈疾病筛查的效率和准确性。见表4。

3讨论

我国每年新增宫颈癌患者约为1315万，每年约有5万例患者死于宫颈癌。因此对于癌前病变的早期筛查和诊断对宫颈癌的发生具有十分重要的意义[3]。有研究指出HPV的感染与宫颈癌的发生密切的关系，因而临床上将对HPV感染的检测作为诊断宫颈癌的一种重要的辅助筛查手段[4]。TCT检查是一种高质量、高效的单层细胞涂片，是对宫颈癌进行早期筛查和诊断的主要方法之一，TCT检查阅片容易、效果清晰、结果可靠易解读[5]。同时有研究指出，HPV-DNA检测的特异性高于TCT，但是特异度较低。而采用TCT检测及时的特异性较高、敏感性较低[6]。因此本文为了能够找到快速且准确的筛查宫颈癌病变的方法，对2012年1月至2014年1月期间我院妇科门诊接受的381例患者进行HPV和 TCT 检查，对HPV-DNA联合TCT检测在宫颈癌病变筛查中的应用价值进行了探究。

本文研究结果显示，在TCT检查阳性结果的基础上采用病理活检的最后定性，联合应用后能够显著提高对宫颈疾病筛查的效率和准确性。TCT是一种高质量、高效率的现代新技术制作的单层细胞涂片，阅片容易、效果清晰、报告简单明了，这使病理医生和临床医生能够清晰的进行书面交流[7，8]。同时文中结果显示，TCT检测结果与病理组织学结果有一定的相关性，在病变程度高使TCT检查结果与病理活检符合率较高。尽管TCT能够减少假阴性、提高攻击细胞学的敏感度，但是由于活体细胞和脱落细胞的特征有不同之处，没有组织结构，因而不能够将脱落细胞作为最后的诊断依据，因此单一使用HPV-DNA检测不足以对宫颈疾病做出诊断[9，10]。高危型HPV能够导致宫颈癌，但并不是所有的高危型HPV感染阳性者均会患宫颈癌，这也就表示不是所有的宫颈癌患者高危型HPV检测均表现为阳性。因此，检测高危型HPV并不能完全取代TCT、宫颈涂片和宫颈活检等检查[11，12]。但是本文采用HPV-DNA联合TCT检测，对于HPV感染的每一个时期都能做出诊断，还能够避免患者的依从性差和标本间的误差[13]。同时，采用HPV-DNA联合TCT检测还能够最大限度地发现宫颈癌的诱因和宫颈异常细胞，能够分辨出有严重病变的妇女，对将来可能会患病的妇女及早做出诊断[14]。因此采用HPV-DNA联合TCT检测能够减少HPV阴性女性的就诊率，在不典型增生人群和细胞正常的人群中，对于有宫颈细胞癌变倾向的妇女，应当及时发现和预防，对早期宫颈癌患者进行积极的治疗[15]。

综上所述，在对高危人群的筛查中，高危型HPV联合TCT检测取样方便，是一种符合度高且无创的检测方法，适用于宫颈癌前病变的筛查。HPV检测是一种便捷、高效的方法，组织活检能够准确的确定疾病的性质。HPV-DNA联合TCT检测，能够提高宫颈病变的筛查效率，进而降低宫颈癌的发生率。因此，将上述三种方法结合使用，能够极大限度的补充每个筛查方法的缺陷，及时预防宫颈癌的发生，对早期治疗具有十分重要的意义。

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（收稿日期：2014-12-25）

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