伽玛刀治疗对原发性肝癌患者外周血Th17淋巴细胞的影响

对照组；采用流式细胞仪检测其外周血CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、Th17细胞水平及CD4+/CD8+比值。结果 原发性肝癌患者CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值均显著低于对照组（P<0.05）；CD8+T细胞和Th17细胞分别高于对照组（P<0.05）；放疗后1个月， CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值均较治疗前上升， 而CD8+T细胞和Th17细胞比例下降， 差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 原发性肝癌患者处于免疫抑制状态， 伽玛刀治疗可降低其外周血Th17细胞水平， 调节T细胞亚群平衡， 增强机体免疫功能。

【关键词】 肝肿瘤；伽玛刀；流式细胞术；T淋巴细胞亚群；Th17细胞

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.17.059

原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤， 致死率在所有恶性肿瘤中占第三位， 70%的患者就诊时为中晚期无手术机会， 且术后复发、转移率高。Th17细胞是一种新的CD4+T淋巴细胞亚群， 在多种肿瘤组织中高表达， 抑制细胞免疫， 使肿瘤细胞发生免疫逃逸， 促进肿瘤复发、转移[1]。体部伽玛刀是一种新型的立体定向三维适形放疗技术， 多项临床研究证实原发性肝癌伽玛刀治疗后局部控制率高， 并发症少[2]。临床上已观察到伽马刀治疗后， 肝癌患者免疫能力增强甚至使远处的转移灶缩小或消失， 但这种免疫增强的具体机制仍不清楚， 本研究通过检测肝癌患者伽玛刀治疗前后外周血Th17细胞数量及T淋巴细胞亚群的变化， 探讨伽玛刀对肝癌免疫功能的影响及可能机制。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取2013年1月～2014年6月在本院接受体部伽玛刀治疗的43例原发性肝癌患者为研究对象（研究组）， 所有患者均符合2001年第八届全国肝癌学术会议通过的原发性肝癌诊断标准， 临床诊断为原发性肝癌或行肝穿活检病理学明确诊断。其中男25例， 女18例；年龄27～65岁， 平均年龄（49.5±6.28）岁， 肝功能Child-Pugh分级A级31例， B级12例；甲胎蛋白（AFP） >20 μg/L者33例；有肝区疼痛者21例， 门静脉癌栓者11例， 少量腹水者9例。病例选择排除合并有影响机体免疫功能疾病的患者， 且未使用影响机体免疫功能的药物。同时选43例健康体检者作为正常对照组， 男28例， 女15例， 年龄25～60岁， 平均年龄（47.3±5.1）岁。

1. 2 治疗方法 采用OUR-QGD型三维立体定向伽玛射线体部治疗系统。治疗的总剂量及时间分割根据肿瘤大小、部位、全身状况、周围组织放射敏感性决定， 采用50%～70%等剂量曲线包绕靶区， 通过剂量-体积直方图进行评估， 靶区周边总剂量4000～6000 cGy， 单次剂量260～600 cGy， 分割10～18次， 每周照射3～5次。

1. 3 检测方法 伽玛刀治疗前1 d、放疗后1周、1个月分别抽空腹外周血送检， 采用流式细胞计数仪（ XL/XL-MCL， 美国贝克曼公司）检测CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值、Th17/CD4+比值；放疗期间观察患者疼痛及胃肠道症状变化， 每周复查血常规、肝肾功能；治疗后4周行腹部增强CT、AFP检查， 评价疗效。

1. 4 统计学方法 采用SPSS17.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2. 1 T细胞亚群、Th17细胞免疫功能变化比较。见表1。

2. 2 临床疗效及并发症 治疗后4周行腹部增强CT检查， 肿瘤明显缩小者32例， 近期有效率74.4%；AFP均有不同程度下降， <20 μg/L者19例；21例肝区疼痛患者中， 完全消失13例， 减轻8例；11例门脉癌栓患者中， 4例癌栓消失。

治疗后， 13例出现了Ⅲ度骨髓抑制， 以白细胞、血小板下降为主， 予以细胞白介素（IL）-11、粒细胞集落刺激因子等治疗恢复正常；26例治疗后谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）一过性轻中度升高， 血清白蛋白下降， 予以保肝、补充人血白蛋白后1～2周恢复正常；17例出现低热、轻中度恶心、呕吐， 经抗炎、补液、保护胃黏膜及止吐等对症处理好转。

3 讨论

Th17细胞是近年来新发现的一种CD4+T细胞亚群， 来源于前体T淋巴细胞， 因分泌IL-17而被命名。IL-17则通过刺激肿瘤基质细胞及成纤维细胞， 使肿瘤微环境发生炎性反应， 促进一些血管源性因子（CXCL1、CXCL5、CXCL6等）高表达， 促肿瘤组织微血管形成[3]；IL-17还通过诱导IL-6生成， 激活致癌Stat3信号通路， 进一步促血管形成并促存活基因上调。另一方面， IL-17的高表达致肿瘤微环境中干扰素-γ（IFN-γ）生成减少， 而IFN-γ的下降必然会抑制Fas介导的细胞毒T淋巴细胞的毒效应机制， 使机体免疫监视功能下降， 肿瘤细胞发生免疫逃逸[4]。文献报道[5]肝癌组织中Th17细胞浸润数目升高， Ⅲ、Ⅳ期明显高于Ⅰ、Ⅱ期， IL-17蛋白在癌组织中的表达明显高于癌旁组织及正常肝组织， 并随着肿瘤的浸润、转移呈升高趋势， 说明Th17细胞是肝癌的促效应细胞， 其数量的多少可作为判断肝细胞癌侵袭性、进展以及预后的一个潜在的重要指标。

CD4+T细胞介导的细胞免疫在机体抗肿瘤效应中起关键作用， 临床研究证实[6]， 原发性肝癌患者细胞免疫功能低下， 表现为外周血CD4+T细胞数量下降， CD4+/CD8+比值倒置， 外周血CD4+T淋巴细胞数量与AFP、肿块大小、临床分期和肿瘤恶性程度密切相关。本研究显示43例肝癌患者治疗前与健康体检者相比外周血CD3+T、CD4+T细胞数量及CD4+/CD8+比值下降， CD8+T细胞及Th17细胞数量增多， 存在T淋巴细胞亚群紊乱， 与临床报道一致[7]。

伽玛刀作为一种立体定向三维适形放疗技术， 在不增加正常组织照射剂量的情况下提高了肿瘤有效生物剂量， 取得良好的临床疗效。本研究对43例原发性肝癌患者采用伽玛刀治疗， 近期有效率为74.4%， 并发症少， 与孙全新等[8]的报道相近， 近年来伽玛刀治疗原发性肝癌已被多家肿瘤中心采用[2]。有关肝癌患者伽玛刀治疗后免疫功能变化的报道较少， 该研究发现伽玛刀治疗后1周CD3+T、CD4+T细胞数量及CD4+/CD8+比值升高， 与治疗前相比差异无统计学意义（P>0.05）， 而Th17细胞数量下降明显， 差异有统计学意义（P<0.05）， 提示伽玛刀治疗后， 机体CD4+T细胞免疫功能未受抑制， 而作为促癌效应的Th17细胞下降明显；伽玛刀治疗后1月CD3+T、CD4+T细胞数量及CD4+/CD8+比值升高明显， Th17细胞数量持续下降， 与治疗前相比差异均有统计学意义（P<0.05）， 提示伽玛刀治疗后患者细胞免疫功能是逐渐增强的， 与免疫抑制细胞Th17的下降， T淋巴细胞亚群趋向平衡有关。推测其可能机制为：短疗程， 高分割剂量的伽玛刀治疗， 在肿瘤局部造成炎性环境， 首先使免疫抑制T淋巴细胞及其分泌的免疫抑制因子下降， 抑制肿瘤血管的生成， 动物试验证实IL-17-/-鼠在MCA诱导的致癌模型中， 降低了血管生成， 成瘤率低；随着放疗后瘤细胞的增殖性死亡、抗原决定簇暴露， 有利于抗原提呈细胞识别、提取、加工肿瘤抗原， 促进前体T细胞向CD4+T细胞分化， 打破免疫耐受， 从而提高机体细胞免疫功能。

肿瘤细胞与各免疫细胞之间的相互作用复杂， Th17细胞在肝癌发生、发展中如何抑制免疫， 促肿瘤逃逸及伽玛刀对肝癌患者免疫功能影响的具体机制还需更深入研究。

参考文献

[1]Wang J， Xu K， Wu J， et al. The changes of Th17 cells and the related cytokines in the progression of human colorectal cancers.BMC cancer， 2012（12）：418.

[2]张江灵， 陈少谊， 陈运萍.伽玛刀治疗原发性肝癌对肝功能的影响.四川医学， 2011， 32（8）：1214-1216.

[3]Huber M， Heink S， Grothe H， et al. A Th17-like developmental process lead to CD8+Tc17 cells with reduced cytotoxic activity. Eur J Immmunol， 2009， 39（7）：1716-1725.

[4]Wakita D， Sumida K， Iwakura Y， et al. Tumorinfiltrating IL-17 producing T cells support progression of tumor by promoting angiogenesis. J Immunol， 2010， 1（7）：1927-1937.

[5]王平， 武传星， 吕凌， 等. IL-17在原发性肝癌组织中的表达及其临床意义.中国肿瘤生物治疗杂志， 2011， 18（2）：216-219.

[6]阚晓， 潘家超， 荆燕， 等.原发性肝癌患者微波消融治疗后外周血T淋巴细胞亚群的变化.实用肝脏病杂志， 2014， 17（1）：71-73.

[7]邓俊， 陈卫， 陆忠华， 等.原发性肝癌患者射频消融治疗前后外周血T细胞亚群及NK细胞的变化.实用肿瘤杂志， 2013， 16（5）：416-418.

[8]孙全新， 张业嵩. 56例原发性肝癌的伽玛刀治疗分析.现代诊断与治疗， 2013， 24（3）：612-613.

[收稿日期：2015-01-04]

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