趋化因子1在胃癌中的表达及其与临床病理参数的关系

[摘要] 目的 探讨趋化因子1（CXCL1）在胃癌中的表达及胃癌微血管生成的关系。 方法 选择2013年10月～2014年10月于秦皇岛市第一医院手术切除并经病理确诊的79例胃癌组织和18例癌旁正常胃黏膜组织，采用免疫组织化学EnVision法检测各组织中CD34和CXCL1的表达情况，分析CXCL1和CD34-MVD的相关性。 结果 与癌旁正常胃黏膜组织比较，胃癌组织中CXCL1呈过表达（P < 0.05），且有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者（P < 0.05）；胃癌组织中CXCL1的表达和CD34-MVD呈正相关（r = 0.715，P < 0.05）。 结论 胃癌组织中CXCL1的高表达可能通过参与胃癌微血管生成进而影响胃癌的侵袭转移。

[关键词] 趋化因子1；胃癌；血管再生

[中图分类号] R73 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）10（b）-0091-03

[Abstract] Objective To investigate the expression of CXCL1 and the relationship between CXCL1 and angiogenesis in gastric cancer carcinoma. Methods Seventy-nine tissues of gastric carcinoma and 18 tissues of non-neoplastic gastric from October 2013 to October 2014 confirmed by pathological diagnosis in the Qinhuangdao First Hospital were collected， the expression patterns of CXCL1 and CD34 in all gastric tissues were determined by immunohistochemical staining analysis and the correlation between CXCL1 and CD34-MVD was analyzed. Results Compared with normal gastric mucosa tissues adjacent to carcinoma， the expression of CXCL1 was higher in the gastric carcinoma （P < 0.05）， and the positive expression was significantly higher in the tissues with metastasis than that in the tissues without metastasis （P < 0.05）. The expression of CD34-MVD was positively correlated with CXCL1 in gastric carcinoma （r = 0.715， P < 0.05）. Conclusion The high expression of CXCL1 plays an important role in metastasis of gastric through participating in tumor angiogenesis.

[Key words] CXCL1； Gastric carcinoma； Angiogenesis

血管生成可以为肿瘤生长提供必要的养分，是肿瘤侵袭转移的必要条件，CXC家族趋化因子是具有多种功效的细胞因子超家族，它们可以趋化白细胞的迁移，调节血管生成和血管重构，是肿瘤发病过程中重要的促血管生成因子。近年来，趋化因子/受体生物轴作为肿瘤血管的调控分子已成为肿瘤转移研究的热点[1]，CXCL1是CXC类趋化因子的一员，能够通过其特异性受体CXCR2直接作用于血管内皮细胞促进血管生成，介导肿瘤的生长和转移[2]。本研究采用免疫组织化学法检测胃癌中CXCL1的表达，探讨CXCL1与胃癌血管生成的关系。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2013年10月～2014年10月秦皇岛市第一医院确诊为胃癌的手术切除组织79例，配对手术切缘正常胃黏膜组织18例，其中男52例，女27例；年龄48～79岁，中位年龄63.5岁；低分化34例，中高分化45例。所有患者均有详细的临床病理资料，术前均未接受放化疗，标本均经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化 采用EnVision方法，鼠抗人CXCL1购自武汉博士德公司，鼠抗人CD34和试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司，将所有组织分别行CXCL1和CD34免疫组化染色，抗体滴度均为1∶100，染色步骤按试剂盒说明书进行，用PBS代替一抗作为阴性对照，二氨基联苯胺（DAB）显色后苏木精复染，中性树胶封片。

1.2.2 免疫组织结果判读 阳性表达定位细胞质内，呈棕黄色阳性，无棕黄色染色或阳性细胞数<10%为阴性，阳性细胞率≥10%为阳性表达；CD34标记的胃癌组织微血管密度（MVD）计数：CD34主要表达于血管内皮细胞膜，微血管染色呈棕黄色，分布不均，主要位于癌灶边缘，癌细胞密集区，首先在低倍镜下观察切片，确定新生血管密集的3个视野（即新生血管热点区），然后在高倍镜下计数视野内染色阳性的微血管数，取3个视野计数结果的均数作为该切片的MVD。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验；相关性检验采用Spearman相关分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CXCL1蛋白的表达与胃癌临床病理关系

CXCL1在胃癌组织和正常胃黏膜组织中均有表达，且在胃癌组织中表达上调（0.2954±0.0126），与正常胃黏膜组织（0.1208±0.0027）比较差异有统计学意义（P < 0.05），并且CXCL1在低分化胃癌组织中的表达高于中高分化癌组织（P < 0.05），有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者（P < 0.05），而在不同性别、年龄中的表达差异均无统计学意义（均P > 0.05）。

2.2 MVD的表达与胃癌的临床病理关系

在正常胃黏膜组织中的MVD计数为（23.38±7.51）个/视野；在胃癌组织中MVD为（43.52±9.34）个/视野，差异有统计学意义（P < 0.05）。且CD34-MVD在低分化胃癌组织中计数高于中高分化胃癌组织（P < 0.05），有淋巴结转移者MVD计数明显高于无淋巴结转移者，差异有统计学意义（P < 0.05），但在不同性别、年龄的计数差异均无统计学意义（均P > 0.05）。

2.3 胃癌组织CXCL1和CD34-MVD表达的相关性

Spearman等级相关分析显示，在胃癌中CXCL1与CD34-MVD的表达呈显著正相关（r = 0.715，P < 0.05）。

3 讨论

血管生成是恶性肿瘤生长的必要条件，在肿瘤发生、转移过程中发挥着关键作用[3]。Folkman等[4]首先在20世纪70年代提出肿瘤血管生成理论，指出肿瘤的生长和转移依赖于肿瘤血管的生成。实体肿瘤在没有血管生成时肿瘤只能长到1～3 mm，不会发生转移，当肿瘤直径超过2 mm时，就需要新生血管提供营养物质，肿瘤新生血管生成以后，肿瘤呈指数倍增，随之增加转移机会[5]。近年来诸多学者围绕肿瘤血管生成进行了大量的实验研究，探究肿瘤血管生成的相关因子及受体可以为抑制肿瘤血管生成的靶向治疗提供有效的理论基础[6]。

CXCL1最初在黑色素瘤中发现，在巨噬细胞、嗜中性粒细胞和上皮细胞中有表达，因其结构功能区第一个半胱氨酸前有ELR[谷氨酸-亮氨酸-精氨酸（Glu-Leu-Arg）]结构，CXCL1属于ELR+CXC趋化因子，与其他含有ELR结构的CXC家族成员一样，CXCL1具有促血管生成作用[7]。近年来，学者们在对结直肠癌、卵巢癌、膀胱癌等多项实体恶性肿瘤的研究中发现CXCL1高表达[8-10]，在对基因工程小鼠的研究中，Scapini等[11]发现，CXCL1能够通过募集中性粒细胞并引起中性粒细胞分泌VEGF-A介导血管生成。Shintani等[12]在关于CXCL1与口腔鳞状上皮细胞癌关系的研究中发现，MVD检测显示CXCL1的表达与肿瘤血管形成关系密切，提示CXCL1是高效的促血管生长因子[13-14]。

近年来的研究通过比较胃癌及癌旁正常组织的基因表达发现，CXCL1在胃癌组织中高表达，并且与肿瘤进展和患者的不良预后呈正相关[15-18]。同时Xu等[19]发现CXCL1的特异性受体CXCR2在胃癌组织中也呈高表达。在本次研究中，CXCL1在胃癌组织中表达上调，且肿瘤分化程度低，CXCL1表达上调明显，有淋巴结转移者的阳性表达高于无淋巴结转移者，提示CXCL1的高表达可能与胃癌的侵袭转移有关。

CD34在微血管中的表达良好，特异性较高，在有关肿瘤血管的研究中多采用CD34来标记微血管，目前MVD值是评估肿瘤血管生成状态的金标准[20]。在本次研究中CD-MVD值在胃癌组织中明显高于正常胃黏膜组织，而且低分化组高于中高分化组，有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者，统计分析提示胃癌组织中CXCL1的表达上调和MVD值呈正相关，MVD显示CXCL1可能与胃癌血管生成有关，CXCL1可能通过促血管生成从而参与胃癌的侵袭转移。

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（收稿日期：2016-07-10 本文编辑：任 念）

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