人黑素瘤中TrkB的表达及其意义

【摘要】目的：研究TrkB在人黑素瘤中的表达情况。方法：用免疫组化SP法检测40例人黑素瘤和30例人色素痣组织中TrkB的表达。结果：黑素瘤组织和人色素痣组织中TrkB阳性率分别为77.5%和16.7%，两者间差异有统计学意义（P<0.01）。结论：TrkB在人黑素瘤组织中呈阳性表达，其高表达可能是黑素瘤发生发展的原因之一。

【关键词】TrkB；人黑色素瘤组织；抗肿瘤机制

【中图分类号】R739.5 【文献标识码】A 【文章编号】2095-6851（2014）2-0439-01

恶性黑素瘤（Malignant Melanoma）是一种高度恶性的肿瘤，多发生于皮肤，具有较强的转移侵袭能力。而一旦发生转移，其治疗效果及预后均不理想。目前对于恶性肿瘤转移的机制尚不明确，但越来越多的研究表明恶性肿瘤转移与肿瘤细胞具有抗失巢凋亡能力有关。失巢凋亡（Anoikis）是一种由于缺乏合适的细胞间或细胞与细胞外基质间粘附信息而介导的凋亡^[1]。失巢凋亡抑制是恶性肿瘤细胞在转移时生存于循环系统的先决条件，是转移的起始阶段^[2]。酪氨酸激酶受体B（Tyrosine kinase receptor B， TrkB）是细胞增殖、分化、凋亡和转移途径中信号传导的调控因子，是抑制失巢凋亡和诱导转移的蛋白[3-4]。本实验采用免疫组化SP法检测40例人黑素瘤和30例人色素痣组织中TrkB的表达，探讨其在黑色素瘤转移中的作用。

材料与方法

一 材料和方法

1.1组织标本：收集2010年至2013年柳州市工人医院以及其它医院未行放化疗黑色素瘤病人行肿瘤切除术后组织标本40例（A组），收集柳州市工人医院2012年至2013年间色素痣经切除后的组织标本30例（B组）。

1.2主要试剂：TrkB鼠抗人单克隆抗体购自美国R&D公司；生物素标记山羊抗小鼠IgG、免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司；二甲苯、乙醇、氯化钠等为国产分析纯；苏木素购自上海信然生物科技有限公司；中性树胶封片剂购自上海瑞齐生物科技有限公司。采用SP免疫组化法，按试剂盒说明书进行操作。以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3 实验方法：全部标本经石蜡包埋，以4μm厚度连续切片，按照试剂盒说明将切片脱蜡、水化后采用SP免疫组化法，按试剂盒说明书进行操作。取已知切片作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判定：TrkB主要表达于细胞膜和细胞浆内，阳性物质为棕黄色。在高倍镜下任选择5个视野，参照Salvesen 等的标准，综合染色强度以及阳性细胞所占比例进行半定量分析。染色强度的评分标准如下：不着色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分。阳性细胞所占比例评分标准如下：阳性细胞<10%为0分，在10%-40%之间者为1分，40%-70%之间者为2分，≥70%者为3分。两者评分相加后，0-1分为（-），2分为（+），3-4分为（++），5-6分为（+++）。

1.5 统计学处理采用SPSS18.0软件包处理数据，采用秩和检验，P<0.05被认为有统计学差异。

二 结果

TrkB主要表达于细胞膜和细胞浆内，阳性物质为棕黄色（见图2）。A组（黑色素瘤）中TrkB阳性率为77.5%，B组（色素痣）中TrkB的阳性率为16.7%。秩和检验显示两者间差异有统计学意义（P<0.01，见表1、图1）。

表1 TrkB在黑素瘤和色素痣组织中的表达（* P<0.05）

三 讨论

恶性肿瘤的转移是恶性肿瘤最具有特征的生物学特性，同时肿瘤细胞发生转移也是临床上导致患者治疗失败和引起最终死亡的重要原因。目前许多学者针对肿瘤的转移特性做了大量研究，发现肿瘤细胞能转移至与其原发瘤所在的组织结构完全不同的别的组织器官里生存并增殖，很大程度上与这些肿瘤细胞具有抗失巢凋亡能力有关。某些具有抗失巢凋亡能力的瘤细胞脱落后不能马上引起细胞凋亡，而是经过旁自分泌和旁分泌来抵抗凋亡，然后通过血流，淋巴等继续扩散到其他组织器官，并增殖分化继续生长，即发生远处转移，这种抗失巢凋亡的能力是癌细胞发生转移并且生存的首要条件和关键因素^[5]。

随着实验研究的不断深入，在胃癌，肠癌，肺癌，卵巢癌等恶性肿瘤的细胞体外培养研究中均发现^[6]TrkB高表达，并具有较强的抗失巢凋亡能力。TrkB/BDNF信号通路的激活与神经母细胞瘤的转移扩散、化疗药抵抗及预后差有关，并影响神经系统的生长发育、神经元群的成形以及神经系统功能的维持。在“失巢凋亡”的调控过程中，许多蛋白激酶信号分子都是以细胞基质的黏附作用为媒介，最终成为失巢凋亡的重要调节因子。研究者对激酶信号介导失巢凋亡的研究大部分集中在 PI3K/Akt和Raf/MEK/ERK激酶信号途径^[7]，特别是PI3K/AKT信号途径的激活能增强癌症细胞的生存和抵抗细胞凋亡的能力。TrkB基因也是一种癌基因 ，主要通过激活PI3K/Akt信号通路诱导癌细胞生长和增殖 ，并促进肿瘤细胞的转移和浸润。

在本实验中，我们发现在人黑素瘤组织切片中，TrkB的阳性表达率为77.5%，与其在色素痣中阳性表达率（16.7%）有明显差异，其差异有统计学意义。这与研究者在鼻咽癌（阳性率82.5%）^[8]胆管癌（阳性率69%）^[9]以及卵巢上皮癌（阳性率为67.12%）^[10]中的研究结果一致。由于TrkB被证实为失巢凋亡抑制因子，在本实验中证实黑素瘤中存在TrkB的高表达，因此我们推测黑素瘤可能具有抗失巢凋亡能力并通过这种能力引起其转移。

虽然TrkB作为一种抗失巢凋亡因子，被认为可能通过PI3K/Akt和Raf/MEK/ERK的信号级联反应引起肿瘤细胞的转移，但其是否同时存在其它作用途径以及在特定肿瘤中的具体作用机制如何均有待于进一步研究。

参考文献

[1]章应惠，屈伸.失巢凋亡[J].医学分子生物学杂志，2005，2：1-4.

[2]Naora H， Montell DJ. Ovarian cancer metastasis： integrating insights from disparate model organisms[J]. Nat Rev Cancer， 2005，5：355-366.

[3]Douma S， Van Laar T， Zenenhoven J， et al. Suppression of anoikis and induction of metastasis by the neurotrophic receptor TrkB [J]. Nature，2004，430（7003）：1034-1039.

[4]Geiger TR， Peeper DS. The neurotrophic receptor TrkB in anoikis resistance and metastasis： a perspective[J].Cancer Res，2005，65：7033-7036.

[5]Coniglio S J， Jou T S， Symons M. Rac1 protects epithelial cellsagainst anoikis[J]. Biol Chem， 2001， （30）： 28113-28120.

[6]Reginato MJ，Mills KR，Pau1us JK，et al. Integrins and EGFR coordinately regulate the pro-apoptotic protein Bim to prevent anoikis[J]. Nat Cell Biol，2003，5（8）：733-740.

[7]温文胜，张哲，谢莹，等.鼻咽癌细胞系抗失调凋亡特性的研究.广西医科大学学报 2009；26（2）：172.

[8]温文胜，张哲，赵卫民，等.酪氨酸激酶受体 B在鼻咽癌和颈淋巴结转移灶中的表达及其意义.广西医科大学学报 2009；26（1）：100-102.

[9]魏伟，汤恢焕，霍胜军，等.TrkB在胆管癌中的表达及其临床意义.现代生物医学进展 2008；8（9）：1687-1689.

[10]于晓辉，蔡斌，杨懿霞，等.酪氨酸激酶受体B在卵巢上皮性癌中的表达及其意义.中国癌症杂志 2008；18（7）：501-506.

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