干扰素治疗慢性乙型肝炎对患者T淋巴细胞CD28表达的影响

【摘要】 目的 探讨干扰素治疗慢性乙型肝炎对患者T淋巴细胞CD28表达的影响。方法 符合纳入标准的慢性乙型肝炎患者112例， 给予干扰素α-2b抗病毒治疗， 疗程为12个月， 治疗前后测定并比较患者淋巴细胞CD28表达情况。结果 治疗后， 患者CD4+CD28+ T细胞由（0.43±0.1）×109/L增加至（0.56±0.2）×109/L， CD8+CD28+ T细胞由（0.19±0.2）×109/L增加至（0.31±0.1）×109/L， CD28的表达均明显高于治疗前， 比较差异有统计学意义（P<0.05）。高病毒载量组与低病毒载量组患者治疗后T淋巴细胞CD28表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论 干扰素α-2b可以有效增加慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞CD28的表达， 其抗病毒作用可能与有效激活CD4+CD28+和CD8+CD28+ T细胞有关。

【关键词】 干扰素α-2b；慢性乙型肝炎；CD28

慢性乙型肝炎（CHB）是一种全球性的传染性疾病， 约有20亿人群感染过乙型肝炎病毒（HBV）， 中国是乙型肝炎的高发地区， 其中约有1.2亿人群是病毒携带者[1]， 严重危害人类健康。治疗CHB， 抗病毒治疗是关键。目前认为， T淋巴细胞介导的细胞免疫在清除HBV中发挥关键作用， 其活化和发挥作用的关键因素是T淋巴细胞表面协同刺激分子极其配体的正常表达[2]。T细胞只有在抗原特异性的第一信号和T细胞上的CD28与抗原提呈细胞上的B7分子结合提供的第二信号同时存在时， 才开始增殖并分泌相关细胞因子[3]。因此， 提高T细胞CD28的表达， 对HBV的有效清除有着积极的意义。本研究旨在探讨干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎对患者T淋巴细胞CD28表达的影响， 以期为临床用药进一步提供相关临床证据。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 收集本科2012年1月～2013年10月收治的CHB患者112例， 纳入标准：①符合中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会制定的病毒性肝炎防治方案中CHB的诊断标准[4]；②排除HBV相关疾病， 合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染及自身免疫性疾病患者；③未接受过抗病毒及免疫治疗。其中男71例， 女41例， 平均年龄（32.5±11.2）岁。所以患者均给予干扰素α-2b 500万单位隔日肌肉注射1次抗病毒治疗， 疗程为12个月。治疗前后检测并比较患者CD28表达情况。病毒载量>1×106 IU/ml为高病毒载量患者， <1×106 IU/ml为低病毒载量患者， 比较高病毒载量患者与低病毒载量患者治疗后CD28表达情况。

1. 2 CD28表达情况检测 外周血淋巴细胞CD28表达检测：各加入50 μl EDTA抗凝血至样品测定管中， 每管中加入相应抗体10 μl， 振荡混匀， 室温避光孵育20 min， 加入溶血素1 ml， 振荡混匀， 室温避光放置10 min， 1200 r/min的转速离心4 min弃上清， 加入PBS 1 ml， 1200 r/min转速离心4 min， 弃上清， 加入PBS 400 μl， 混匀后上机检测。使用三色荧光进行检测， 其中CD4和CD8采用FITC标记， CD28使用PE标记。软件Cellquest进行分析。于治疗前后各采血检测1 次上述指标。

1. 3 统计学方法 2 结果

2. 1 抗病毒治疗前后CD28表达情况比较 12个月的疗程结束后， 患者CD4+CD28+ T细胞及CD8+CD28+ T细胞较治疗前明显增加， 比较差异均有统计学意义（P<0.05）。表明干扰素α-2b可以增加慢性乙型肝炎患者T淋巴细胞CD28的表达 ， 详见表1。

注：正常组与患者治疗前相比， aP<0.05；治疗后与治疗前相比， bP<0.05

2. 2 不同病毒载量患者治疗后CD28表达情况比较 高病毒载量组与低病毒在两组在治疗后患者CD4+CD28+ T细胞及CD8+CD28+ T细胞CD28的表达差异均无统计学意义（P>0.05）， 详见表2。

3 讨论

CD28分子是免疫球蛋白超家族的成员， 是T细胞初始活化过程中不可缺少的第二信号， 在病毒感染的初始阶段， T细胞在CD28介导的刺激信号作用下开始克隆增殖， 并促进白细胞介素-2的分泌， 为清除病毒做准备， 而缺乏CD28的介导作用， 将导致T细胞的无能[5]。Fan等[6]研究发现， 阻断CD28 /B7可以抑制T细胞活化， 并诱导免疫耐受。研究表明， CHB的预后与患者抗病毒免疫密切相关， 正常的免疫反应可以有效清除HBV。但CHB患者的细胞免疫功能与正常人相比常有不同程度的下降， T淋巴细胞CD28表达显著降低， 不利于HBV的清除， 更容易导致病毒的持续感染， 以致病情迁延不愈。因此， T淋巴细胞CD28分子表达的减少可能是CHB患者病毒难以清除的原因之一， 增加T淋巴细胞表面CD28分子的表达可以提高HBV的有效清除率。

理想的抗HBV方案应该具有激活足够免疫细胞、肝细胞损伤较少及有效终止病毒持续感染的优点。干扰素是一种具有抗病毒和免疫调节双重机制的多功能糖蛋白， 通过上调I型主要组织相容性复合体FC受体， 促使CTL细胞分化并提高宿主免疫应答， 从而清除HBV感染的细胞[7]。目前， 干扰素已广泛用于CHB的抗病毒治疗， 并取得了一定的疗效， 但其对CHB患者T淋巴细胞表明CD28分子表达的影响的相关研究较少。

本研究中， 通过12个月疗程的干扰素α-2b治疗， 患者CD4+CD28+ T细胞由（0.43±0.1）×109/L增加至（0.56±0.2）×109/L， CD8+CD28+ T细胞由（0.19±0.2）×109/L增加至（0.31±0.1）×109/L， CD28分子表达均明显高于治疗前。结果表明， 干扰素α-2b有效上调CHB患者T淋巴细胞CD28的表达， 此机制可能与干扰素α-2b的抗病毒作用有关。然而， 高病毒载量组与低病毒载量组患者治疗后T细胞CD28表达情况并无显著差异， 与张晓帮等[8]报道较为一致。

综上所述， 干扰素治疗可有效增加T淋巴细胞CD28的表达， 从而达到激活T细胞免疫反应的抗病毒作用， 在乙肝治疗中发挥作用。

参考文献

[1]邹德力.谈乙型肝炎病毒的传播、预防和致病机制.中国医药导报， 2009， 6（20）：151-152.

[2]涂远航， 马勇， 谷曼， 等.拉米夫定对慢性乙型肝炎患者CD28表达的影响.郑州大学学报（医学版）， 2011， 46（5）：795-797.

[3]郝峰， 方芳， 李艳， 等.乙肝患者外周血T淋巴细胞上CD28表达及临床意义.中国民康医学（上半月）， 2007， 19（19）：826-827.

[4]中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会.病毒性肝炎防治方案.中华传染病杂志， 2001， 19（1）：56.

[5]朱传武， 罗端德， 曾令兰， 等.慢性乙型肝炎患者干扰素疗效与CD28阳性外周血单个核细胞的关系.临床肝胆病杂志， 2002， 18（4）：251-252.

[6]Fan K， Wang H， Wei H， et al. Blockade of LIGHT/HVEMand B7/CD28 signaling facilitates long-term islet graft survivalwith development of allospecific tolerance. Transplantation， 2007， 84（6）：746.

[7]向晓玲， 蔡杰， 杨云. 干扰素α-2α联合中药治疗HbeAg阳性慢性乙型肝炎的临床观察. 临床医药实践， 2009（36）：904-905.

[8]张晓帮， 刘波， 徐岳军， 等.慢性乙型肝炎患者外周血CD4+ CD25+、CD8+CD28+淋巴细胞的变化及与病毒载量的关系. 放射免疫学杂志， 2010， 23（1）：77-79.

[收稿日期：2014-05-29]

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