3种方法联合检测在老年梅毒诊断中的应用价值

【摘 要】：目的：研究3种方法联合检测在老年梅毒诊断中的应用价值。方法：本次研究选取的研究对象为2015年1月1日至2017年12月31日期间在我院进行治疗的老年梅毒患者100例，所有患者均接受梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）、梅毒螺旋体明胶凝集法（TPPA）、甲苯胺红不加热血清试验 （TRUST） 。对比三种检查方法的诊断结果。结果：联合检测的梅毒阳性率高于TP-ELISA、TPPA、TRUST单一检测数据，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：3种方法联合检测可提高老年梅毒患者的诊断准确性，临床应用价值较高。

【关键词】：梅毒；梅毒螺旋体明胶凝集法；甲苯胺红不加热血清试验；梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验

【中图分类号】R759.1 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0019（2019）05--01

梅毒是一种由梅毒螺旋体感染引起的系统性传染病，一般经性接触、血液两种途径传播。梅毒患者的临床表现存在复杂性，误诊、漏诊率较高。早期诊断梅毒可避免患者的系统和器官出现不可逆损伤，目前临床用于检测梅毒的血清学方法较多，如快速血浆反应素环状卡片试验（RPR）、TP-ELISA、TRUST、TPPA、胶体金法 （TPAb）等，本文旨在分析三种血清学方法联合应用在梅毒诊断中的效果，择取我院收治的老年梅毒患者100例开展本次研究，正文详细内容如下：

1 资料和方法

1.1 资料

研究对象：我院收治的老年梅毒患者100例（属于2015年1月1日至2017年12月31日期间）。纳入标准：所有患者均经临床确诊为梅毒，并同WS273-2007 中国卫生行业标准梅毒诊断标准相符合。排除标准：患有精神疾病的患者；患有系统性免疫疾病、HIV阳性的患者；合并严重器质性疾病或对青霉素敏感的患者。男、女性患者的比例分别为55例、45例；年龄范围：60-89岁，年龄平均值（77.85±2.91）岁。病程为4周-5年，平均时间为（2.45±0.28）年。

1.2 方法

TP-ELISA检测方法：抗原为经纯化处理的梅毒螺旋体的重组蛋白，使用对固相板条进行包被处理。对抗人体免疫球蛋白G抗体进行梅毒血清及辣根过氧化物酶标记处理，使用TP-ELISA相关试剂盒测定血清特异性梅毒抗体数量，严格按照试剂盒说明书进行操作。

先采用西门子xp化学发光免疫分析仪对梅毒血清进行检测，结果为阳性，则采用TPPA检测进行验证：使用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100μl），第2孔至第4孔均滴一滴（25μl）。使用微量移液管取样品25μl滴入到第1孔中，再使用微量加样器或微量移液管以2n的方式从第1孔稀释到第4孔。使用试剂盒中提供的滴管在第3孔中滴入1滴（25μl）未致敏粒子，在第4孔中加入1滴（25μl）未致敏粒子。使用平板混合器以适当的强度进行混合，时间为30s，加蓋后在室温（15℃-30℃）下水平放置2h。在观察镜上观察和记录其反应图像，利用免疫稀释判定装置进行测定。对照试验：可对每例样品未致敏粒子的反应进行确认则为（-）；可确认每次检查中血清稀释液和致敏粒子以及未致敏粒子的反应则为（-）（介质对照）。阳性对照血清调制成抗体效价为1：320。

TRUST检测方法：①编号：将样品对应试验卡按需编号。②加样：分别在相应的试验卡膝圈内加入待测样品或阴、阳性对照50μl，并在圈中均匀涂开。③加抗原：使用专用塑料滴管吸取抗原，分别垂直滴加一滴（20μl）于圈内血清中。④反应：在23-29℃的条件下，按每分钟100转摇动卡片8min，对应下方标准图观察结果。⑤如需进行效价测定，可将待测血清使用生理盐水做倍比系列稀释（1：2、1：4、1：8、1：16……1：2n），按照上述定性方法进行试验。

TPPA检测、TRUST检测结果均为阳性后，进行滴度试验。TRUST滴度：以呈现明显凝聚反应的最高稀释度作为该标本的凝集效价。

1.3 观察指标

计算三种方法的梅毒检测阳性率。

1.4 统计学处理

将两组各项观察指标数据录入统计学软件SPSS21.0中进行处理，用[n（%）]的形式表示计数资料，卡方检验，差异具有统计学意义的标准为P<0.05。

2 结果

TP-ELISA、TPPA对比梅毒检测阳性率差异不大（P>0.05），但均比TRUST检测数据高（P<0.05），联合检测的梅毒阳性率均比单一检测数据高（P<0.05）。

3 讨论

患者在感染梅毒螺旋体后，机体会产生特异性抗体[1]，其中IgM在机体短期存在，IgG则存在时间长（可终生存在）。临床将IgM作为梅毒早期感染的标志物。在感染2-4周便可检出IgM。

TP-ELISA法是通过双抗原夹心法对特异性TP抗体进行检测，同时还可检测到IgM、IgG抗体，可检出梅毒各期。且基因重组后的TP47抗原包被结合特异性TP抗体可促使梅毒检测的灵敏度提高[2]。TPPA法将TP毒株制备成抗原，与致敏粒子结合成凝集状颗粒对血清梅毒螺旋体抗体进行检测，还可对抗体效价进行测定，生物因素不会对检测结果产生影响[3]，虽然TPPA法的诊断效能比TP-ELISA法更高，但是在临床操作时，技术难度大且检测时间长，易出现误差，而TP-ELISA法利用酶的放大系统有助于检测灵敏度的提高，检测出梅毒螺旋体抗体的时间早于TPPA法。TRUST法的梅毒检测灵敏度、特异性均不如上述两种方法，且梅毒感染早期，患者机体产生的反应素未达到TRUST的检测限，故此容易出现漏诊情况及假阴性结果。而本次通过联合三种血清学检测方法提高了梅毒检测阳性率，减少了误诊、漏诊情况的发生。

总而言之，TP-ELISA法联合TPPA法、TRUST法对老年梅毒患者进行检测具有较高的梅毒检出率，便于临床及时诊治患者。

参考文献

朱建奎.RPR、TRUST、TPPA、ELISA、TPAb五项联合在检测梅毒早期患者中的临床应用[J].中国实用医药，2016，11（15）：100-101.

王春阳，邹学森.梅毒特异性与梅毒非特异性联合检测对临床的指导意义[J].吉林医学，2016，37（6）：1400-1401.

韩红星，李小勇，李冉冉，等.TRUST和TPPA联合检测梅毒的临床应用价值[J].海南医学，2017，28（12）：2044-2045.

叶霞，徐清芳，魏靖，等.TP-ELISA、TPPA、RPR联合检测在梅毒诊断中的应用价值[J].热带医学杂志，2017，17（5）：639-642.

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