梅毒螺旋体不同检测方法在诊断新生儿梅毒中的价值比较

[摘要]目的 探討梅毒螺旋体不同检测方法在新生儿梅毒诊断中的应用价值。方法 选择我院2015年1月～2017年12月确诊的45例新生儿梅毒患者和其对应产妇45例及100例同期健康新生儿作为研究对象，分别采用梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）、密螺旋体颗粒凝集实验（TPPA）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）对所有研究对象血清进行检测，比较三种检测方法对新生儿梅毒的诊断价值。结果 梅毒产妇TRUST试验各血清抗体滴度下梅毒的检测阳性率普遍高于新生儿（100.00% vs. 53.33%，P<0.05）。45例梅毒产妇的三种检测结果均为阳性，新生儿TRUST检测阳性检出率明显低于产妇，差异有统计学意义（53.33% vs. 100.00%，P<0.05）。新生儿TP-ELISA检测阳性检出率和TPPA检测阳性检出率与产妇比较，差异无统计学意义（97.78% vs. 100.00%，100.00% vs. 100.00%，P>0.05）。通过对45例梅毒新生儿和100例健康新生儿血清检测，结果显示，TRUST检测出24例梅毒阳性，TP-ELISA检测出44例梅毒阳性，TPPA检测出100例梅毒阳性，TPPA检测的灵敏度（100.00%）和特异度（100.00%）均明显高于TRUST检测（53.33%，91.00%）和TP-ELISA检测（97.78%，96.00%）。结论 在新生儿梅毒的诊断中，TP-ELISA检测的灵敏度和特异度均较高，适合作为新生儿梅毒的初筛实验，而TPPA检测过程相对繁琐，可作为确诊实验。

[关键词]新生儿梅毒；梅毒螺旋体；检验；诊断；灵敏度

[中图分类号] R759.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）12（c）-0143-03

[Abstract] Objective To explore the value of different methods of Treponema pallidum （TP） in the diagnosis of neonatal syphilis. Methods A total of 45 neonatal syphilis patients， 45 cases of corresponding puerpera and 100 healthy neonates diagnosed in our hospital from January 2015 to December 2017 were selected as study subjects. They were detection with Treponema pallidum enzyme-linked immunosorbent assay （TP-ELISA）， Treponema pallidum particles agglutination assay （TPPA） and toluidine red unheated serum test （TRUST）. The diagnostic value of three detection methods for neonatal syphilis were compared. Results The positive rate of syphilis detected by TRUST test in all serum antibody titers of syphilis parturients was generally higher than that of newborns （100.00% vs. 53.33%， P<0.05）. Positive results were found in all 45 TP parturients by these three methods， the positive rate of TRUST in TP newborns was significantly lower than that in TP parturients，with significant difference （53.33% vs. 100.00%， P<0.05）. There was no significant difference of positive results in TP-ELISA and TPPA between TP newborns and TP parturients （97.78% vs. 100.00%，100.00% vs. 100.00%， P>0.05）. After serum check for 45 TP newborns and 100 healthy newborns， it showed that 24 cases of positive results were found by TRUST， 44 cases of positive results were found by TP-ELISA and 100 cases of positive results were found by TPPA. The sensitivity （100.00%） and specificity （100.00%） of TPPA were significantly higher than those of TRUST （53.33%， 91.00%） and TP-ELISA （97.78%， 96.00%） （P<0.05）. Conclusion In the diagnosis of neonatal syphilis， the sensitivity and specificity of TP-ELISA are high， which is suitable for the initial screening test of neonatal syphilis. The detection process of TPPA is relatively complicated and can be used as a confirmatory test.

[Key words] Neonatal syphilis； Treponema pallidum； Test； Diagnosis； Sensitivity

梅毒是由苍白（梅毒）螺旋体感染人体而引起的常见性传播疾病，主要通过血液、性、母婴途径传播，传染性很高[1]。近年来我国梅毒的发病率呈现上升趋势，对人类以及社会健康均造成严重威胁。对梅毒血清学方面的检查已很完善，但单一检查方式仍存在不足之处，尤其针对新生儿梅毒患者，在血清检测方面还有很多问题需要研究[2-3]。在临床工作中，不同检测方法的应用情况不同，各方法互相补充，从而得到确切的诊断，所以正确的实验室检查在新生儿梅毒诊断初筛中具有至关重要的作用。本研究针对梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）、梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、密螺旋体颗粒凝集实验（TPPA）三种梅毒检测方法检测新生儿血清进行分析，旨在探讨其临床价值。

1资料与方法

1.1一般资料

选择我院2015年1月～2017年12月确診的45例新生儿梅毒患者作为新生儿组及对应45例产妇作为产妇组，选择100例同期健康新生儿作为对照组。45例新生儿梅毒患儿中，男20例，女25例；年龄1 h～14 d，平均（7.14±1.14）d。健康新生儿中，男45例，女55例；年龄为1 h～13 d，平均（6.97±1.18）d。产妇组中，年龄22～38岁，平均（26.92±3.19）岁。新生儿组与对照组的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。纳入标准：①确诊为梅毒患者；②合并硬下疳、多形皮损等；③家属对本研究知情，并签署同意书。排除标准：①合并心、肝、肾严重病变；②意识不清。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂 采集所有对象空腹静脉血2～3 ml，离心分离血清处理之后，于-20℃环境保存留用，所用仪器包括TECAN全自动酶免分析仪（HAMILTON公司）、离心机。TRUST试剂盒由上海荣盛公司生产，批号为160121；TP-ELISA试剂盒由英科新创公司生产，批号为160318；TPPA试剂由日本富士珠海丽珠公司生产，批号为VN40628。

1.2.2 TPPA法检测 使用明胶颗粒包被梅毒螺旋体Nichols株菌体成分做成致敏颗粒，然后对其进行检测分析，若样本中TP抗体与颗粒结合时开始出现凝集反应，则试验结果判断为阳性结果。若颗粒于孔底聚集成纽扣形状则试验结果可判断为阴性。

1.2.3 TRUST试验 以心磷脂包被的胆固醇作载体，和血清中非特异性抗体产生抗体抗原反应，产生微粒。若抗体和抗原微粒反应，生成肉眼能见到的粉红凝集块，则试验结果判断为阳性结果。根据试剂盒上的具体说明，依据1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32倍比进行稀释，以获得梅毒血清的TRUST滴度。

1.2.4 TP-ELISA检测 使用被超声波击碎的Nichol株抗原，通过ELISA法进行检测，按照试剂说明书操作，酶标仪波长设置为450 nm，空白孔调零，测量OD值，当OD值/cutoff值≥1则结果为阳性，OD值/cutoff值<1则结果为阴性。

1.3观察指标

观察梅毒产妇和新生儿的TRUST试验抗体滴度、三种检测方法的结果以及灵敏度和特异度，灵敏度=真阳性例数/（真阳性例数+假阴性例数）×100.00%，特异度=真阴性例数/（真阴性+假阳性例数）×100.00%。

1.4统计学方法

采用SPSS 21.0统计学软件对数据进行分析和处理，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1不同TRUST试验抗体滴度下产妇和新生儿梅毒检测阳性率的比较

梅毒产妇TRUST试验各血清抗体滴度下梅毒的检测阳性率普遍高于新生儿，差异有统计学意义（100% vs. 53.33%，P<0.05）（表1）。

2.2 45例确诊梅毒母亲和新生儿血清梅毒螺旋体抗体检测结果的比较

45例梅毒产妇的三种检测结果均为阳性，新生儿TRUST检测阳性检出率明显低于产妇，差异有统计学意义（53.33% vs. 100.00%，P<0.05）。新生儿TP-ELISA检测阳性检出率和TPPA检测阳性检出率与产妇比较，差异无统计学意义（97.78% vs. 100.00%，100.00% vs. 100.00%，P>0.05）（表2）。

2.3三种检测方法诊断新生儿梅毒结果的比较

通过对45例梅毒新生儿和100例健康新生儿血清检测，结果显示，TRUST检测出24例梅毒阳性，TP-ELISA检测出44例梅毒阳性，TPPA检测出100例梅毒阳性，TPPA检测的灵敏度（100.00%）和特异性（100.00%）均明显高于TRUST检测（53.33%，91.00%）和TP-ELISA检测（97.78%，96.00%）（P<0.05）（表3）。

3讨论

胎儿在宫内感染苍白螺旋体，或在哺乳期等接触传染可导致新生儿梅毒的发生。妊娠期梅毒产妇体内苍白螺旋体可以经过脐静脉和胎盘传染胎儿，最早可在妊娠后7周发生宫内感染，但多数发生在妊娠4个月之后，大多数会造成流产、早产以及先天性梅毒儿等[4-5]。新生儿梅毒的防治已经是一项重要的社会以及医学问题，因此早期诊断干预治疗具有重大意义[6]。我国先天性梅毒对新生儿的健康已经产生较大影响，为了实现优生优育，对出生人口质量进行优化，早期的诊治是基础工作。在临床工作中，对于不同检测方法的应用意义明显，各方法互补优劣，得到最佳诊断效果，所以正确的实验室检查在新生儿梅毒诊断初筛中具有至关重要的作用[7-8]。在感染5～7周后可对非特异性抗体进行检测，在感染后2周可对特异性IgM抗体进行检测，在感染后4周才能检测出特异性IgG抗体[9-10]。本研究结果显示，TRUST检测和TP-ELISA检测的灵敏度分别为53.33%和97.78%，均明显低于TPPA检测的100.00%（P<0.05）；TRUST检测和TP-ELISA检测的特异度分别为91.00%和96.00%，均明显低于TPPA检测的100.00%（P<0.05）。TRUST属于非特异性的检测试验，其应用较多的领域主要在梅毒的疗效效果观察以及再感染情况的判断中。该抗体会比特异性抗体晚3周左右出现，并且随病程进展，会不断升高，经治疗之后又可明显降低。但是在临床上也有其他集中疾病对TRUST试验结果具有一定的影响，例如活动性肺结核、传染性肝炎、慢性肾炎、肝硬化、病毒性感染等，因此这些患者易出现假阳性的情况[11-12]。TP-ELISA、TPPA均为特异性试验，前者是通过基因重组特异性抗原包被酶标板孔，然后通过双抗原夹心法对特异性IgG、IgM抗体检测，在筛查高危人群梅毒方面应用广泛，是血站、医院较为常用的方法，可作为一种首选方法[13-14]。后者是通过Nichols株梅毒螺旋体特异性抗原检测梅毒抗体，具有很高的稳定性，批间差极小，是目前国内外公认的有效检测实验，但是也存在窗口期问题有待商榷。文献报道显示，TPPA在结肠癌、免疫性疾病、妊娠、毒品成瘾等人群中具有0.1%的假阳性[15]。

综上所述，不可仅依靠梅毒的血清学试验阳性诊断新生儿梅毒，其只能提示标本中有类脂抗体，也不能因实验室检查阴性而排除梅毒螺旋体感染，需要具体分析，在新生儿梅毒的诊断中，TP-ELISA检测的灵敏度和特异度均较高，适合作为新生儿梅毒的初筛实验，而TPPA检测过程相对繁琐，可作为确诊实验。

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