Galectin—3和E—cadherin蛋白在胃癌中的表达及其意义

[摘要] 目的 探讨Galectin-3和E-cadherin蛋白在胃癌中的表达及其意义。 方法 选择60例胃癌组织标本，采用免疫组化方法检测胃癌组织中Galectin-3和E-cadherin蛋白的表达情况，同时选择60例正常胃黏膜检测Galectin-3和E-cadherin蛋白的表达情况作为对照。 结果 胃癌组织Galectin-3阳性表达率高于正常胃黏膜组织（P < 0.01），E-cadherin蛋白阳性表达率低于正常胃黏膜组织（P < 0.01）。分化程度越高、浸润程度越浅、淋巴结无转移的胃癌组织E-cadherin蛋白阳性率越高（P < 0.01）。浸润程度越深、淋巴结有转移的胃癌组织Galectin-3的阳性表达率越高（P < 0.01）。 结论 胃癌组织中E-cadherin阳性表达率低于正常胃黏膜组织、Galectin-3的阳性表达率高于正常胃黏膜组织。E-cadherin的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关，而Galectin-3表达率与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移有关。

[关键词] 胃癌；Galectin-3；E-cadherin蛋白

[中图分类号] R735.2 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）24-0086-03

胃癌是临床常见的恶性肿瘤，近年来死于胃癌的患者呈逐年上升的趋势。癌症的发生与多种因素相关，而胃癌的侵袭以及转移是导致患者死亡的主要原因之一。Galectin-3是一种凝集素，参与多种生理以及病理过程，其在细胞生长、凋亡、粘附以及新生血管形成、肿瘤细胞转移和浸润中均发挥重要的作用。E-cadherin蛋白是一类介导细胞间同质粘附的钙依赖性跨膜糖蛋白，其表达与恶性肿瘤的分化程度、侵袭力、转移呈负相关，与预后呈正相关[1]。本研究探讨胃癌组织中Galectin-3及E-cadherin蛋白的表达，分析其在胃癌的发生、发展中的作用。

1资料与方法

1.1 一般资料

选择2010～2012年在我院手术治疗切除的胃癌组织标本60例，其中男28例，女32例，年龄31～66岁，平均（53.1±18.4）岁。肿瘤直径<4 cm者25例，≥4 cm者35例。肿瘤浸润深度：黏膜及黏膜下层（T1+T2）者8例，肌层及浆膜层（T3+T4）者52例。淋巴结转移：有32例，无28例。分化程度：高分化及中分化29例，低分化31例。同时取手术切除组织正常切缘的正常胃黏膜组织作为对照组。

1.2检测方法

采用免疫组化法对胃癌黏膜组织以及正常胃黏膜组织中Galectin-3及E-cadherin蛋白表达进行检测。Galectin-3兔抗人单克隆抗体由上海研生生物技术科技有限公司提供，E-cadherin兔抗人单克隆抗体由上海研生生物技术科技有限公司提供。标本甲醛固定、石蜡包埋、连续4 μm切片。清洗玻片后烤干，浓硫酸中浸泡24 h，冲洗后烘干，多聚拉氨酸进行放脱片处理，烤干，备用。切片，梯度酒精脱水、水洗。3%的过氧化氢溶液室温下孵育15 min，以封闭内源性过氧化物酶的活性。水冲洗后，PBS缓冲液洗涤3次。将切片置于枸橼酸缓冲液中，微波炉内高火烘烤5 min，中高火烘烤8 min，冷却至室温。然后自来水冲洗，蒸馏水冲洗，PBS缓冲液洗涤3次。甩干，加入封闭血清，在37℃下孵育15 min。倒去血清，滴加一抗或者一抗的工作液，37℃，孵育2 h。PBS缓冲液洗涤3次。加二抗工作液，37℃，孵育20 min，PBS缓冲液洗涤3次。加DAB显色液，有表达后立即终止显色。

1.3 免疫组化结果判定

1.3.1 Galectin-3结果判定 位于上皮细胞的胞浆内，棕黄色颗粒。判断结果[2]：每张切片随机观察5个视野，统计阳性细胞数，取平均阳性率记分。0分：<5%；1分：5%～24%；2分25%～49%；3分：50%～74%；4分：≥75%。染色强度：0分：无着色；1分：淡黄色；2分：黄色或者棕黄色；3分：褐色或者棕褐色。阳性细胞率得分+染色强的得分3～6分者为染色阳性。

1.3.2 E-cadherin蛋白结果判定 在正常组织内位于上皮细胞的细胞膜上，在癌组织中位于细胞浆和细胞膜中。染色呈一致的棕黄色颗粒。染色阳性判断标准与Galectin-3结果判定相同。

1.4 观察指标

比较胃癌组织与正常胃黏膜组织中Galectin-3及E-cadherin蛋白表达阳性率。统计患者的一般资料以及临床资料，分析不同临床病理参数与Galectin-3及E-cadherin蛋白表达阳性率的关系。

1.5 统计学分析

采用SPSS 12.0统计学软件对数据进行相关统计学分析。计数资料采用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌组织与正常胃黏膜组织中Galectin-3及E-cadherin蛋白表达情况

Galectin-3位于上皮细胞的胞浆内，呈棕黄色颗粒，见图1。E-cadherin蛋白在癌组织中细胞膜和细胞浆均有表达，在正常胃黏膜中主要位于上皮细胞的细胞膜上，呈棕黄色颗粒，见图2。60例胃癌组织中Galectin-3阳性例数44例，占73.3%。60例正常胃黏膜中23例阳性，占38.3%。E-cadherin蛋白在胃癌组织中有23例患者呈阳性染色，占38.4%，在正常胃黏膜中60例为阳性，占100.0%。见表1。

2.2 不同临床资料Galectin-3及E-cadherin蛋白阳性表达情况

分化程度越高、浸润程度越浅、淋巴结无转移的胃癌组织E-cadherin蛋白阳性率越高（P < 0.01）。浸润程度越深、淋巴结有转移的胃癌组织Galectin-3的阳性表达率越高（P < 0.01）。见表2。

3讨论

正常胃黏膜上皮细胞是由原始新生细胞分裂生长分化而来，受到严格的调控，不会发生癌症。干细胞包含各种原癌基因和抑癌基因，绝大多数情况下原癌基因的特性不表达，不会形成致癌物质，因此也就不能发育成癌细胞。有胃癌家族史者原癌基因可能更容易表达出来，这就是遗传的因素。除了遗传等内在因素外，还有很多外在的致癌因素，如高危人群面临的各种非遗传因素，也可直接诱发或长期破坏胃黏膜屏障使促癌物质更易诱发干细胞癌基因表达或基因突变而产生致癌物，使新生不成熟的原始细胞不能分化成具有正常功能的胃黏膜上皮细胞，而是变成各种分化程度不良且生长失控的非正常细胞。若机体的免疫监测功能正常，往往可以清除少量的异常细胞，但当长期心理状态不佳引起内分泌系统异常及免疫功能长期低下、或异常细胞由于某种未知原因逃逸了机体的免疫监测时，则异常细胞最终发展成机体无法控制其生长的胃癌细胞，完成癌变过程。

凝集素动物细胞和植物细胞都能够合成和分泌，能与糖结合的蛋白质，在细胞识别和粘着反应中起重要作用，主要是促进细胞间的粘着。凝集素具有一个以上同糖结合的位点，因此能够参与细胞的识别和粘着，将不同的细胞联系起来。凝集素具有多方面的特性，最大的特点在于他们能识别糖蛋白和糖肽，特别是细胞膜中复杂的碳水化合物结构，即细胞膜表面的碳脂化合物决定簇。Galectins是一种可溶性凝集素，能够结合含半乳糖的糖结合物。Galectin-3（β-半乳糖苷结合蛋白）是凝集素中的一种，广泛表达于肿瘤组织和正常组织中，主要表达在上皮细胞中和免疫下拨中，参与细胞的多种生物学过程，包括细胞生长、分化、凋亡、粘附、血管生成等。目前有多种研究结果显示Galectin-3与肿瘤细胞的浸润和转移具有一定的关系。孙春旭[3]研究结果显示食管癌组织中Galectin-3表达较高。吕云福等[4]研究结果显示，甲状腺乳头癌患者肿瘤细胞中Galectin-3的表达阳性率显著高于正常甲状腺组织。冶俊玲[5]研究结果认为Galectin-3是诊断甲状腺微小乳头状癌的重要标志。王晔等[6]研究结果显示Galectin-3不仅可以促进膀胱癌的发生发展，还可以促肿瘤中的血管生成。本文研究中胃癌组织中Galectin-3的阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织，这与以上研究结果相似，说明其参与了胃癌的发生和发展。张征等[7]研究结果显示Galectin-3阳性表达与结肠腺癌肿瘤体积、淋巴结转移相关（P < 0.05），与结肠腺癌患者性别、年龄无相关关系。在本次研究中不同性别、年龄的患者Galectin-3阳性表达率没有差异，而浸润程度达肌层及浆膜层的患者Galectin-3阳性表达率显著高于浸润程度达黏膜及黏膜下层的患者（P < 0.01）。而有淋巴结转移的患者阳性表达率显著高于无淋巴结转移的患者（P < 0.01）。说明Galectin-3的阳性表达与肿瘤的浸润深度以及是否有淋巴结转移有关，但在本次研究中，其阳性表达率与胃癌的浸润深度以及分化程度没有关系。这与琚晨焰等[8]的研究结果相似。Galectin-3与胃癌的临床分期、浸润深度、淋巴结转移、远处转移和预后有关（P < 0.05）。

钙粘附蛋白（cadherin）是一类介导细胞间同质粘附的钙依赖性跨膜糖蛋白。主要分为于上皮组织中的E-cadherin，分布于神经和肌肉组织中的N-cadherin和胎盘组织中的P-cadherin三类。人类的E-cadherin编码基因定位于16号染色体q22.1附近，由723～748个氨基酸组成，分子量为80～124 kD，分子中存在一个疏水基因，位于跨膜区，氨基末端位于细胞膜外，是钙离子的结合位点，对Ca2+有高度敏感性，羧基末端位于细胞浆内，与肌动蛋白相连，由α、β、γ三个亚单位（catenins）及其他一些连接蛋白组成，对维持细胞形态、细胞运动和调节细胞粘附具有重要作用。绝大多数研究表明，E-cadherin的表达与恶性肿瘤的分化程度、侵袭力、转移负相关与预后正相关。杨万广等[9]研究结果显示结肠癌中E-cadherin表达低于癌旁组织。李昌秀等[10]研究结果显示E-cadherin在食管癌中表达为38.33%，明显低于两者正常食管组织中的阳性率（P < 0.01），及E-cadherin共同参与食管癌的发生且影响癌细胞转移。许健等[11]研究结果显示，E-cadherin低表达的乳腺癌患者更容易出现淋巴结转移。高源等[12]研究结果显示E-cadherin表达均与肿瘤TNM分期、分化程度、淋巴结转移及浸润深度相关（P < 0.05）。在本次研究中，胃癌组织中E-cadherin的阳性表达率显著低于正常胃黏膜组织（P < 0.01）。这与既往的一些研究结果相似。分化程度越高的患者其E-cadherin的阳性表达率越高，浸润越深的癌组织E-cadherin的阳性表达率越低，而有淋巴结转移的癌组织表达率低于无淋巴结转移的癌组织。说明E-cadherin的阳性表达率下调与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、浸润深度等有关。E-cadherin的作用主要是参与维护正常细胞之间的连接[13]。当其表达下调或者缺失的时候，细胞间的连接黏附力下降，细胞更容易向四周浸润生长，这可能是导致E-cadherin表达率低的癌组织浸润程度深、容易有淋巴结转移的原因之一[14，15]。分化越差的肿瘤细胞E-cadherin的表达率越低，而分化差的癌细胞更容易发生浸润生长以及远处转移。

综上所述，胃癌组织中E-cadherin阳性表达率低于正常胃黏膜组织、Galectin-3的阳性表达率高于正常胃黏膜组织。E-cadherin的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关，而Galectin-3表达率与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移有关。

[参考文献]

[1] 李宏伟，张正孟，王铁山，等. 结直肠癌组织中Ezrin和E-cadherin蛋白的表达特点及意义[J]. 中国现代普通外科进展，2012，15（12）：958-962.

[2] Wong AS，Gumbiner BM. Adhesion-independent mechanism for suppression of tumor cell invasion by E-cadherin[J]. J Cell Biol，2003， 161（16）：1191-1203.

[3] 孙春旭. Galectin-3及TFPI-2在食管癌中表达相关性研究[J]. 西南国防医药，2013，23（2）：123-125.

[4] 吕云福，谢贤和，何超，等. Galectin-3及CyclinD1在良恶性甲状腺肿块中的鉴别价值[J]. 中华内分泌外科杂志，2013，7（1）：34-37.

[5] 冶俊玲. CK19、Galectin-3、MC和TPO在甲状腺微小乳头状癌中的表达及意义[J]. 青海医药杂志，2012，45（7）：2-5.

[6] 王晔，刘岩，张志勇，等. Galectin-3和MMP-14对膀胱尿路上皮癌血管生成作用的研究[J]. 中国实验诊断学，2012，16（11）：2028-2031.

[7] 张征，孙哲，段彬彬，等. CAIX、Galectin-3在结肠腺癌组织中的表达及意义[J]. 山东医药，2012，52（39）：65-67.

[8] 琚晨焰，胡小云，张文昌，等. 胃癌组织中Galectin-3和VEGF的表达及其临床意义[J]. 南昌大学学报：医学版，2010，50（3）：25-28.

[9] 杨万广，王万鹏，张谢夫. ALDH1A2、MMP2和E-cadherin在结肠癌组织中的表达及相关性[J]. 世界华人消化杂志，2013，21（4）：362-366.

[10] 李昌秀，徐红梅，杨达荣，等. 食管癌组织中COX-2与PTEN、E-cadherin表达及临床病理的关系[J]. 吉林医学，2013，34（1）：10-13.

[11] 许健，张颂，章远江，等. 乳腺癌C-erbB-2和E-cadherin的表达与淋巴结转移的关系[J]. 江苏医药，2013，39（1）：85-87.

[12] 高源，郭凤英，沙金. Twist、E-cadherin和HGF在胃癌组织中的表达及意义[J]. 宁夏医科大学学报，2012，34（12）：1253-1256.

[13] 姜丽红，孙雪，王文革，等. E-cadherin在肺腺癌中的差异性表达[J].中外医疗，2013，8（6）：45，47.

[14] 孟新，张程达，牛雅萱，等. E-cadherin和CD44V6对乳癌腋窝淋巴结转移的预测价值[J]. 郑州大学学报：医学版，2013，57（1）：112-114.

[15] 丛玲华，高志安，钟国平，等. 人肺癌组织E-cadherin和PTEN及HIF-1α蛋白表达临床意义的探讨[J]. 中华肿瘤防治杂志，2013， 30（3）：196-199.

（收稿日期：2013-05-13）

推荐访问： 胃癌 蛋白 表达 意义 Galectin

---