丙型肝炎总核心抗原与丙型肝炎抗体联合检测的临床价值

【摘要】 目的：探讨丙型肝炎核心抗原(HCV-cAg)和丙型肝炎抗体(HCV-Ab)联合检测在临床中的应用价值。方法：用酶联免疫吸附试验(ELISA)法联合检测HCV-cAg和HCV-Ab，并与荧光定量PCR法检测丙型肝炎核酸(HCV-RNA)的结果进行对照。结果：165例患者中共检出HCV-Ab阳性132例(80％)、阴性33例（20％)，HCV-RNA 阳性119例(72.1％)、阴性46例(27.9％)，HCV-cAg阳性99例(60％)、阴性66例(40％)。在132例HCV-Ab阳性标本中HCV-RNA阳性为85例(64.4％)、阴性为47例(35.6％)，在99例HCV-cAg阳性标本中HCV RNA阳性为96例(96.9％)、阴性为3例（3.1％)，HCVAb和HCV-cAg联合检出阳性标本150例（90.9％)，阴性15例（9.01％)由此可见：HCV-cAg与HCV-RNA检出率差异无显著性(P >0．05)，HCV-Ab检出率与HCVAb和HCV-cAg联合检出率差异有显著性(P

【关键词】 HCV总核心抗原；HcV抗体；联合检测

【中国分类号】 R74.1【文献标识码】 B【文章编号】 1044-5511（2012）02-0107-02

【Abstract】 Objective To investigate the hepatitis B core antigen ( HCV-cAg ) and hepatitis C antibodies ( HCV-Ab ) combined detection in clinical application value. Methods: using the enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA ) method combined detection of HCV-cAg and HCV antibodies, and fluorescence quantitative PCR assay for detection of hepatitis C virus nucleic acid ( HCV-RNA ) results are controlled. Results: 165 cases of detection of HCV antibody positive in 132 cases, HCV - cAg positive 99 cases, HCV RNA was positive in 119 cases, In 132 cases of HCV positive samples and negative in 33 cases were HCV RNA positive were 85 cases ( 64.4%), 47 cases ( 35.6%), and in 99 cases of HCV - cAg positive samples and negative in 66 cases were HCV RNA positive were 96 cases ( 96.9%), 3 cases ( 4.52%), HCVAb and HCV-cAg joint inspection positive specimen 150 cases (90.9%), negative 15 cases (9.01%) thus: HCV-cAg with HCV-RNA detection rate no significant difference (P > 0.05), HCV-Ab detection rate and HCVAb and HCV-cAg joint detection rate (P < O.05)conclusion combined detection of HCV antibodies and HCV - cAg increase HCV infection detection efficiency, can effectively avoid missed, clinicians could improve the diagnostic accuracy rate, suitable for use in ordinary medical institutions to promote the use of.

【Key words】 HCV total core antigen; HCV antibody; combined detection

丙型肝炎(hepatitis C)是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染引起的一种慢性传染病。HCV为55nm直径的球形颗粒，去包膜后为33nm直径的核壳蛋白包被的核心部分，内含全长约9400个核苷酸的单股正链RNA基因组，HCV主要引起慢性肝炎，感染途径是血液传播、性接触传播、母婴传播及输血或血液制品传播。据WHO统计，自1989年丙型肝炎被发现以来，估计全球约1．7亿-2．0亿人感染丙型肝炎病毒(HCV)，感染率为3％，每年新发丙型肝炎病例约3.5万例，丙型肝炎在早期临床表现上与乙型肝炎相比，症状较轻，但是其较乙型肝炎易早期出现肝硬化，导致肝癌，病死率较高^［1］ ，严重威胁着全球公众的健康。我国HCV感染率为2．5％ ～4．6％^［2］。由于丙肝病毒的高度变异性，疫苗的研究在短期内难有突破性进展，目前尚无有效的丙型肝炎疫苗可利用，丙型肝炎的预后不良，目前也无理想的特效药物和治疗措施。因此，早期诊断是防止丙型肝炎传播的有效措施。本研究对临床疑为丙型肝炎的165例门诊及住院患者，联合检测丙肝核心抗原(HCV-cAg)和HCV-Ab，并采用荧光定量PCR法检测丙型肝炎病毒核酸(HCV-RNA)证实，以观察两种血清学指标联合检测在诊断HCV感染的临床价值。

1 资料与方法

1.1检测对象及检测项目：真空采血管抽取临床疑为丙型肝炎病毒感染的患者空腹静脉血3 mL，及时分离血清后同时检测HCV-Ab、HCV-cAg、HCV-RNA。在2010年9月至2011年4月期间共收集到在我院门诊或住院就诊临床疑为丙型肝炎病毒感染的患者血清165例。

1.2试剂和检测方法:HCV-Ab检测采用上海科华生物制品有限公司生产的ELISA法丙型肝炎抗体检测试剂盒；丙型肝炎HCV-cAg检测采用湖南康润制药有限公司生产的丙型肝炎核心总抗原检测试剂盒，实验操作均按标准操作规程进行，阳性判断标准均按试剂说明书上进行设置，所有阳性结果均经过双孔复查后判断结果；HCV-RNA检测采用中山大学达安基因股份有限公司丙型肝炎病毒核酸试剂盒PCR荧光探针法检测，以病毒copy>1．0×103IU／ml为阳性，copy<1．0×103 IU／ml为阴性。

1.3仪器：伯乐680自动化酶免分析仪、伯乐1575全自动酶标洗板机。Line genePCR仪荧光定量分析仪

1．4 统计学方法 采用配对卡方检验

2 结果

表1 165例血清HCV-cAg、HCV抗体及HCV-RNA检测结果

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2.1 从表1中可以看出：三项指标检测情况在165份筛查标本中，HCV-Ab阳性132例(80％)、阴性33例（20％)，HCV-RNA 阳性119例(72.1％)、阴性46例(27.9％)，HCV-cAg阳性99例(60％)、阴性66例(40％)。在132例HCV-Ab阳性标本中HCV-RNA阳性为85例(64.4％)、阴性为47例(35.6％)，在99例HCV-cAg阳性标本中HCV RNA阳性为96例(96.9％)、阴性为3例（3.1％)，HCVAb和HCV-cAg联合检出阳性标本150例（90.9％)，阴性15例（9.01％)

由此可见：HCV-cAg与HCV-RNA检出率差异无显著性(P >0．05)，HCV-Ab检出率与HCVAb和HCV-cAg联合检出率差异有显著性(P

2.2 对12例HCV-cAg和HCV-RNA均呈阳性而抗HCV阴性及3例HCV-cAg和HCV-Ab均阳性而HCV-RNA阴性者于6个月后进行复查，结果前12例均表现为HCV-Ab阳性，证实为HCV感染；而后3例HCV-cAg和HCV-Ab比色OD值略高于Cutof值，随访仍为HCV-RNA阴性，排除HCV感染。

3 讨论

1989年Coo等用分子克隆技术发现了丙型肝炎病毒(HCV)。HCV是多变异的病毒，在同型各株间，甚至同一患者不同时期分离的克隆之间亦有差异，基因序列的差异，将导致编码产物抗原型的不同^［3］ ，流行病学资料显示，在肝癌发病率中等的地区，如日本、意大利、西班牙等国家肝癌多由丙型肝炎所致，也有资料表明发达国家的慢性肝病主要与HCV感染有关^［4］。丙型肝炎病毒主要是通过血液传播，由于输血后丙型肝炎引起的医疗纠纷不断，而且受血次数越多，感染病毒的几率越高，如患者机体免疫力差，而输入的血液中丙型肝炎病毒复制活跃，就会造成丙型肝炎感染。由此可见，尽早检出和早期防治丙型肝炎感染刻不容缓。由于丙型肝炎在临床上症状较轻、发展较慢，大多数人无症状，重症化少见，容易被忽视，但与肝硬化、肝癌等的发生和发展显著相关^［5］。目前认为，对HCV复制活跃的患者，尽早开始抗病毒治疗有可能中止或延缓病程发展，从而改善患者的预后，因此对HCV感染的早期诊断非常重要。

目前，对于HCV感染的临床诊断仍以ELISA法检测HCV-Ab为主，但抗体检测存在着一些不足之处。首先，由于使用HCV基因重组抗原质量及各抗原片段包被比例的不同，各厂家试剂间的灵敏度和特异性存在着一定差异。其次，HCV-Ab产生有一个明显的窗口期，平均为70d，所以抗一HCV阴性并不能排除携带HCV并且具有传染性的可能。最后，在抗HCV ELISA法试剂盒中，由于酶标抗体是广谱抗人IgG抗体，对吸附在固相上的IgG抗体无筛选作用，这就降低了检测的特异性。临床使用中常出现灰区样品检测结果，导致结果难以判断。此外，常用的HCV检测方法还有PCR定性或定量检测，PCR检测HCVRNA灵敏度高，人在感染HCV 1-2周，血清中即可检测到HCV-RNA，HCV-RNA可以反映病毒的复制与传染性，为病毒血症的标志，是诊断HCV的"金标准"。但HCV-RNA检测影响因素也多，且所有器材必须高压灭菌，需要专业的人员操作，需要精密的仪器设备、较HCV检测的窗口期缩短至15d^［6］，HCV核心抗原也是在HCV感染者体内出现的早期感染标志，几乎与HCV RNA同时出现。据文献报道，HCV核心抗原阳性样品中HCV-RNA阳性率为85％ 以上，两者之间密切相关^［7］.本研究中99例HCV-cAg阳性患者中检出HCV-RNA阳性96例，阳性率为96．9％，也证实了二者之间高度相符，未检出的患者可能是由于病毒复制不活跃(拷贝数低于1．0 X 103 IU／m1)或检测试剂方面的其他原因所致。

从本研究可以看出，采用ELISA方法联合检测HCV-Ab和HCV-cAg，对实验设备、条件要求不高，操作简便、成本低廉，对HcV感染的检出效率明显高于单一HCV抗体的检出率，可有效避免漏检，提高临床医生的诊断准确率，适合在普通医疗机构推广使用。这种抗原抗体联合检测的思路也是HCV筛查试剂盒和血清学检测的发展方向， 目前国外已有这类商品试剂盒应用的报道^［8］。

由此可见，联合检测HCV-Ab和HCV-cAg，无需特殊设备、简便易行、成本低廉，显著提高了HCV感染的检出效率，可有效避免"窗口期"漏检，为临床诊断HCV感染提供了正确的依据，适合在普通医疗机构推广使用。

参考文献

［1］ 谢立，黄德庄，时洪波，等．用酶联免疫夹心法测定肝炎患者血清丙型肝炎抗原［J］．中华检验医学杂志，2005，28(11)：1159

［2］ 中华医学会肝病学分会，中华医学会传染病与寄生虫学分会．丙型肝炎防治指南［J］．中华肝脏病杂志，2004，12(4)：194-198．

［3］ 周桂兰，等．病毒性肝炎防治新进展［M］．中国古籍出版社，2005：173．

［4］ 关伟，高艳，周云芳．2492例住院患者丙肝抗体检测与分析［J］．哈尔滨医药，2005，25(4)：14

［5］ 朱灵．丙型肝炎病毒感染的研究进展［J］．检验医学与临床，2008，5(15)：939-941．

［6］ Lee S R，Petenson，J，Niven P，et a1．Efficacy of a hepatitis C virus coreantigen enzyine linked immuoeirtrent essay for the identifieafion of windowphas blood donatisures［J］．Jvox Sanguints，2001，(96)：1282

［7］ Nubling C M，Unger G，Chudy M，et a1．Sensitivity of HCV core antigenandHCV RNA detection in the early infection phasel Jj．Transfusion，2002，48(8)：1037．

［8］ A Sehnuriger,S Dominguez，MA Valantin，et a1．Early detection of hepatitis C virus infection by use of a new combinedantigen-antibody detection assay：potential use for high-riskindividuals［J］．J Clin Microbiol，2006，44(4)：1561～1563

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