欣通胶囊对麻醉犬血栓素B2/6—酮—前列腺素及心肌梗死范围的影响

[摘要] 目的 研究欣通胶囊对急性心肌梗死模型犬心肌的保护作用和机制，从而研究中药复方对冠心病的治疗方法，为临床开发新药提供依据。 方法 通过结扎犬冠状动脉左前降支复制急性心肌梗死模型，通过十二指肠给予受试药物，观察不同剂量组对模型犬血栓素、前列腺素、心脏定量组织学的影响。 结果 与假手术组比较，模型组TXB2/6-K-PG升高，4、6 h差异有统计学意义（P < 0.05，P < 0.01）。与模型组比较，欣通胶囊中剂量组6 h的TXB2/6-K-PG降低（P < 0.05）；欣通胶囊高剂量组、地奥心血康组在4、6 h TXB2/6-K-PG降低，差异有统计学意义（P < 0.05，P < 0.01）。欣通胶囊高剂量组及地奥心血康组能够缩小心肌梗死范围。 结论 欣通胶囊对急性心肌梗死犬具有一定的保护作用，其机制可能是通过缩小心肌梗死面积，维持血栓素与前列腺素平衡等途径实现的。

[关键词] 欣通胶囊；心肌梗死；血栓素B2；6-酮-前列腺素

[中图分类号] R542.2+2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）06（a）-0005-03

急性心肌梗死是由于冠状动脉急性闭塞血流中断，使得部分心肌因严重的持久性缺血而发生的局部坏死，是心血管内科常见的急症，病情凶险，病死率高[1]，据报道心肌梗死90%以上是由于冠状动脉粥样硬化病变基础上血栓形成而引起的[2]。欣通胶囊由黄芪、西洋参、水蛭、地龙、土鳖虫、三七、山茱萸、冰片8味药物组成，具有补气养阴，活血化瘀，息风通络，开窍醒神的功效[3]。本实验采用犬结扎左冠状动脉前降支造成急性心肌梗死模型，观察欣通胶囊对犬实验性心肌梗死血栓素、前列腺素、心肌梗死面积的影响，为其治疗冠心病心肌梗死提供实验依据[4]。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 药品

阳性对照药：地奥心血康胶囊（成都地奥制药集团有限公司，批号：1112042）；受试药物：欣通胶囊（黑龙江久久药业有限公司，批号：20110309）。

1.1.2 试剂

TXB2试剂盒（美国R﹠D公司，批号：111130）；6-K-PG试剂盒（美国R﹠D公司，批号：111130）；硝基四氮唑蓝（美国Amresco公司，批号：0329）；戊巴比妥钠（中国医药集团上海化学试剂公司，批号：F971104）；枸橼酸钠（无锡市民丰试剂厂，批号：030405）；0.9%氯化钠溶液（长春豪邦药业有限公司，批号：S11040302）；复方酒精消毒液（齐齐哈尔双鹤消毒产品开发有限公司，批号：120403）。

1.1.3 实验动物

清洁级健康杂种犬（由黑龙江中医药大学GLP实验室提供），体重15～20 kg，雌雄兼用。

1.1.4 主要仪器

Anthos 2010酶标仪（郑州博赛生物工程有限责任公司）；TGL-16G型高速台式离心机（上海医用分析仪器厂）；HX-200动物呼吸机（成都泰盟科技有限公司）；电子分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。

1.2 实验方法

1.2.1 造模和分组

取健康实验犬随机分为6组，每组5只。即假手术组、模型组、欣通胶囊（高、中、低）组，阳性对照药（地奥心血康）组。各组按体重30 mg/kg给予戊巴比妥钠麻醉，背部固定，气管插管，连接人工呼吸机。建立静脉通道，静脉预防性使用0.9%氯化钠溶液，防止失液过多，电解质紊乱。必要时经静脉通道追加3%戊巴比妥钠。剪去腹部正中毛发，局部用酒精消毒，沿腹白线切开上腹部皮肤，暴露十二指肠，在十二指肠上剪一小口，插入橡胶软管，进行荷包式缝合，以备给予受试药物（给予的受试药物体积相同，浓度不同）。于左侧第四、五肋间心脏搏动最明显的位置施开胸术，逐层分离，暴露心脏，于离膈神经前约1 cm处剪开心包，边缘固定，以充分暴露心脏左侧壁，表面最粗大的横行走向的血管即为冠状动脉左前降支，分离冠状动脉左前降支主干中下1/3 交界处，穿线以备结扎，制备急性心肌梗死模型（假手术组只开胸不结扎）。术毕，稳定20 min，结扎冠状动脉，制备实验性急性心肌梗死模型[5]。

1.2.2 给药

结扎后30 min一次性十二指肠给予受试药物。模型组及假手术组给予0.9%氯化钠溶液；受试药组按照由高到低给予欣通胶囊0.8、0.4、0.2 g/kg；阳性对照药组给予地奥心血康0.06 g/kg。

1.2.3 观察指标

1.2.3.1 血栓素（TXB2）、6-酮-前列腺素（6-K-PG）指标测定 观察TXB2、6-K-PG两项指标，TXB2、6-K-PG均采用酶联免疫法进行测定。取待测血浆，用酶标仪按照试剂盒说明书进行测定。

1.2.3.2 计算心肌梗死面积 360 min后立即取出心脏用0.9%氯化钠溶液冲洗，称全心重。在心脏结扎线下，平行冠状沟将心室横切成0.1 cm厚的心肌片，置于pH值7.4 Tris配制的浓度为0.5%的硝基四氮唑蓝染色液中，在37°C恒温水浴中染色5 min，正常心肌染色成蓝紫色，梗死心肌染成灰白色，剪去梗死心肌称重，计算梗死面积[6]（梗死区重占全心重的百分比）。

1.2.3.3 心肌病理切片的检查 将坏死心肌放入10%甲醛中固定，经梯度酒精脱水，石蜡包埋，制成厚7 μm切片，苏木精-伊红（HE）染色进行心肌细胞形态学观察[7-8]。

1.3 统计学方法

统计学方法采用SPSS 10.0软件处理所得数据，选用One-way ANOVA进行统计分析，数据以x±s表示。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TXB2/6-K-PG比值的变化

与假手术组比较，模型组4、6 h TXB2/6-K-PG比值增大，且差异有统计学意义（P < 0.05，P < 0.01）。与模型组比较，地奥心血康组在4 h TXB2/6-K-PG比值降低，差异有统计学意义（P < 0.05）；6 h欣通胶囊高剂量组与地奥心血康组均差异有统计学意义（P < 0.01；欣通胶囊中剂量组TXB2/6-K-PG比值降低，差异有统计学意义（P < 0.05）（表1）。

2.2 心肌梗死面积比较

欣通胶囊各剂量组心肌梗死面积均低于模型组，其中欣通胶囊高剂量组和地奥心血康组与模型组比较，差异具有统计学意义（P < 0.05）；欣通胶囊中、高剂量组及地奥心血康组的梗死区重与模型组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）（表2）。

2.3 心脏N-BT染色

各给药组梗死面积均小于模型组，其中欣通胶囊高剂量组与药地奥心血康组效果最好，梗死面积最小（图1）。

A为欣通胶囊高剂量组；B为欣通胶囊中剂量组；C为欣通胶囊低剂量组；D为地奥心血康组；E为模型组。梗死组织在N-BT染色中呈灰白色，非梗死区为蓝色

2.4 HE染色

镜下可见假手术组心肌细胞完整，排列整齐，有少数深染，在正常心肌细胞中也存在；模型组心肌切片可见大量炎性细胞存在，并且可见心肌细胞水肿、深染；欣通胶囊高剂量组细胞可见水肿、深染；欣通胶囊中剂量组有少量炎性细胞存在，少数细胞水肿、深染，心肌细胞呈波浪状；低剂量组可见较多炎性细胞存在，心肌细胞水肿深染；阳性对照药组可见心肌细胞水肿、深染。结果表明，与模型组比较欣通胶囊高中剂量组及阳性对照药组能改善心肌坏死状态（图2）。

A为欣通胶囊高剂量组；B为欣通胶囊中剂量组；C为欣通胶囊低剂量组；D为地奥心血康组；E为假手术组；F为模型组

图2 心肌组织HE染色（×400）

3 讨论

血栓素A2（TXA2）是一种具有强烈促进血管收缩和血小板聚集的生物活性物质，其生物半衰期约30 s，迅速代谢为无活性的TXB2[9]。血管壁内皮细胞合成和释放另一种抗血小板聚集和舒张血管的生物活性物质，称之为前列环素PGI2，其生物半衰期约3 min，迅速代谢生成6-酮-前列腺素F1α（6-Keto-PGF1α）。前列环素PGI2和TXA2是一对拮抗剂，TXA2/PGl2失衡是冠状动脉痉挛、血栓形成和动脉粥样硬化发生的重要环节。临床上TXA2/PGI2的水平由其代谢产物TXB2/6-keto-PGF1α反映[10]。TXB2/6-K-PG比值大小与梗死的程度有关，比值增加，病情严重，比值减小，病情得到缓解。临床上已经将其广泛用于防治缺血性心脑血管疾病[11]。本实验通过检测各给药组不同时间的TXB2/6-K-PG比值，发现欣通胶囊可降低急性心肌梗死模型犬血浆TXB2/6-K-PG比值，维持TXB2/6-K-PG平衡。

随着现代检验技术的发展，为了更好地区分梗死心肌与正常心肌细胞，我们进行N-BT染色[12]，以便观察心肌梗死范围。本实验通过对冠状动脉结扎所在的左心室进行染色，确定梗死心肌，进一步计算出了心肌梗死面积，实验结果充分表明各给药组可不同程度地缩小梗死面积[13]。心肌梗死同时造成大量心肌细胞功能受损、坏死[14]。对坏死心肌进行苏木精-伊红（HE）染色，在镜下观察可发现，急性心肌梗死切片中存在大量炎性细胞，且心肌细胞肿胀、深染、部分心肌细胞排列紊乱、出现空泡变性，核溶解消失[15]。本实验病理组织学检查结果可见欣通胶囊高剂量及阳对药均可改善心肌纤维轻度肿胀、炎性细胞浸润以及局灶性坏死的程度。

[参考文献]

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（收稿日期：2013-03-20 本文编辑：林利利）

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