不同藻源对血艳红慈鲷体色及部分免疫指标的影响

摘要：研究了不同藻源对血艳红慈鲷（Copadichromis trimaculatus）体色以及部分免疫指标的影响。试验配制4种饲料，分别为不添加藻粉的基础组和添加藻粉的盐藻组、裂壶藻组及小球藻组，添加水平均为1%。将平均体重为（9.39±0.55） g的180尾血艳红慈鲷，随机分为4组，每组3次重复，每次重复设置15尾鱼，进行为期45 d的摄食生长试验。结果表明，盐藻组皮肤和鳍条中总类胡萝卜素含量显著高于其他3组（P<0.05），裂壶藻组对血艳红慈鲷体表a*的增加有着明显的促进作用（P<0.05）。盐藻组可显著提高血艳红慈鲷肝脏中的酸性磷酸酶（AKP）、碱性磷酸酶（ACP）和谷丙转氨酶（GPT）的活性（P<0.05），而各组试验鱼血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶（GOT）的活性均无显著差异，空白组含量较高。盐藻组和裂壶藻组对血艳红慈鲷体色有着明显的改善作用，盐藻组可提高其肝脏的免疫机能。

关键词：血艳红慈鲷（Copadichromis trimaculatus）;体表着色;免疫指标

中图分类号：S9         文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2019）02-0100-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.02.022           开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

血艳红慈鲷（Copadichromis trimaculatus）为马拉维湖特有的岩栖类慈鲷，因其体表鲜艳的血红色和较高的怀卵量，得到大多数观赏鱼养殖者的青睐。国内经多代繁殖的慈鲷品质出现退化现象，原生态环境与养殖环境的差异也导致了其体色暗淡，降低其观赏及经济价值。如何维持慈鲷的良好品质，已成为养殖过程中一个普遍性问题。

除环境和基因外，改变饲料的营养成分在一定程度上也可重新展现慈鲷的美丽[1]，而在饲料中添加着色剂也是改变鱼类体色的一种有效方式，可以提高其观赏价值。目前，将微藻作为饲料添加剂来提高鱼的生长性能及控制体色方面已有诸多研究[2]，但对于血艳红慈鲷的研究还未见报道。微藻中含有各种多糖和大量的天然色素[3]，已有研究表明微藻多糖可增强免疫力、具有抗病毒抗炎等多种功效[4]。藻类对于提高水生动物的生长、免疫力以及增强其体色都具有重要意义[5]。

本研究通过在饲料中添加盐藻、裂壶藻及小球藻探究其对血艳红慈鲷体色及部分免疫指标的影响，旨在为血艳红慈鲷增色饵料的研制和开发提供理论依据，提高血艳红慈鲷的观赏价值。

1  材料与方法

1.1  试验用鱼及饲养管理

本试验选择3月龄血艳红慈鲷（9.39±0.55） g为试验对象，分别投喂添加1%的盐藻、1%的裂壶藻、1%的小球藻以及不添加藻粉的4组试验饲料，每个试验组下设置3个平行，每个平行喂养15尾血艳红慈鲷，以Diet1-Diet4分别表示对照组、盐藻组、裂壶藻组、小球藻组，养殖期内水温控制在（26±0.5） ℃，pH为7.8±0.2，投饵率3%，每天9：00和15：30投喂，试验持续养殖45 d。

1.2  样本采集

在试验过程中，每15 d取样1次，取样前各试验组血艳红慈鲷禁食24 h，每重复组取10尾鱼，使用色彩色差仪测定其体色，对鱼进行尾静脉取血（每重复组选出2尾用不含有抗凝剂的针管取血），离心（4 000 r/min ，5 min，4 ℃），取上清并于-80 ℃保存。取皮肤（测线以上）、尾鳍、胸鳍，取肝脏和肠速冻，-80 ℃保存，待测酶活力。

1.3  总类胡萝卜素测定

用电子分析天平准确分别称取皮肤（带鳞片）、鳍（背鳍、尾鳍、臀鳍）、肌肉0.1 g，置于5 mL离心管中，用丙酮定容至5 mL，放入超声波清洗机低温超声波振荡45 min后取出，以4 000 r/min离心10 min，4 ℃静置24 h。将所得的色素萃取液分别置于1 cm比色皿中，以丙酮为空白对照管（比色皿加盖以防止丙酮挥发，影响比色效果），用Thermo Spectronic UVmini-1240型紫外分光光度计进行扫描，找出最大吸收峰处的波长（448 nm），在该波长下测定各组色素萃取液的吸光度。总类胡萝卜素含量（mg/kg）=（A×K×V）/（E×G），其中，E为摩尔消光系数（2 500），G为样品质量（g），A为吸光度，K为常数（104），V为提取液体积（mL）。

1.4  体表色差值的测定

分别在试验开始前、第15天、第30天和结束时测定试验鱼体表色差值，用纱布将鱼体表面的水分吸干，将色差仪的探头垂直紧贴于鱼体背鳍和测线间部位测定各试验鱼体表亮度值L*、紅度值a*、黄度值b*。

1.5  生化指标测定

第45天时，对试验鱼进行尾静脉取血（每重复组选出6尾用不含有抗凝剂的针管取血），离心（4 000 r/min，5 min，4 ℃），取肝脏和肠速冻，-80 ℃保存，待测酶活力。样品解冻后用预冷的生理盐水清洗干净并用滤纸吸干后称重。在预冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，将组织块和预冷匀浆介质（0.85%的氯化钠注射液）按1∶9混合，在匀浆器中进行匀浆，4 ℃下4 000 r/min离心15 min，取上清液备用。采用丙谷丙转氨酶（GPT）试剂盒、谷草转氨酶（GOT）试剂盒测定血艳红的肝脏、血清;采用酸性磷酸酶（ACP）试剂盒、碱性磷酸酶（AKP）试剂盒测定血艳红的肠、肝脏、血清。

1.6  数据分析

数据使用平均值±标准差表示，试验结果采用SPSS 18.0进行单因素方差分析（One-way ANOVA），差异显著时进行邓肯多重比较（Duncan’s multiple range tests），P<0.05表示差异显著。

2  结果与分析

2.1  不同藻源对血艳红慈鲷皮肤中总类胡萝卜素含量的影响

添加不同藻源对血艳红慈鲷皮肤中总类胡萝卜素含量的影响见表1。由表1可知，血艳红慈鲷皮肤中总类胡萝卜素的含量在第15天和第30天时各试验组无显著性差异，第45天时，盐藻组皮肤中总类胡萝卜素含量显著高于对照组、裂壶藻组和小球藻组。

2.2  不同藻源对血艳红慈鲷鳍条中总类胡萝卜素含量的影响

添加不同藻源对血艳红慈鲷鳍条中总类胡萝卜素含量的影响见表2。由表2可知，血艳红鳍条中总类胡萝卜素的含量，在第15天和第30天时各试验组无显著性差异，第45天时，添加藻粉组显著高于对照组。

2.3  不同藻源对血艳红慈鲷 L*值的影响

各试验组血艳红慈鲷L*值（表3）无显著性差异，整体呈现先升后降趋势。

2.4  不同藻源对血艳红慈鲷a*值的影响

添加不同藻源组血艳红慈鲷a*大致呈上升趋势（表4），其中第15天时，裂壶藻组a*显著高于小球藻组，与对照组和盐藻组无显著性差异;第30天时，裂壶藻组显著高于小球藻组、对照组与盐藻组无显著性差异;第45天时，裂壶藻组显著高于其他3组。

2.5  不同藻源对血艳红慈鲷肠道生化指标的影响

添加不同藻源对血艳红慈鲷肠道ACP、AKP活性的影响见表5，其中Diet 1、Diet 2、Diet 4组肠道的ACP活性显著高于Diet 3组（P<0.05），AKP活性Diet 4组显著高于Diet 3组（P<0.05）。

2.6  不同藻源对血艳红慈鲷肝脏生化指标的影响

添加不同藻源对血艳红慈鲷肝脏ACP、AKP、GOT、GPT活性的影响见表6。其中，Diet 2组肝脏的ACP活性和GPT活性都显著高于Diet 1、Diet 3和Diet 4组（P<0.05），AKP活性显著高于Diet 4，与Diet 1、Diet 3无显著性差异（P>0.05），GOT活性与其他各组无显著性差异。

2.7  不同藻源对血艳红慈鲷血清生化指标的影响

添加不同藻源对血艳红慈鲷血清中ACP、AKP、GOT、GPT活性的影响见表7，血清中ACP、AKP、GOT、GPT活性各试验组组在统计学上没有显著差异（P>0.05），但对照组的ACP、AKP、GOT、GPT活性都要高于添加不同藻源。

3  讨论

3.1  不同藻源对血艳红慈鲷皮肤、鳍条、肌肉中总类胡萝卜素含量的影响

类胡萝卜素是一种脂溶性色素，鱼体表由黄到红的颜色都是由其决定的[6]，而鱼体自身又不能合成类胡萝卜素只能将从食物中获取的类胡萝卜素将其沉积或转化为自身所需的类胡萝卜素。β-胡萝卜素是盐藻中类胡萝卜素的主要组成部分[7]，本试验中，第45天时，盐藻组慈鲷皮肤中总类胡萝卜素的含量要显著高于对照组、裂壶藻组和小球藻组，添加藻粉后各组鳍条中总类胡萝卜素的含量均显著高于对照组（P<0.05），这表明盐藻中的类胡萝卜素经过代谢能够在血艳红慈鲷体内得到有效转化，从而起到增色效果，这与杨育凯等[8]和方珍珍等[9]研究相符，说明3种藻粉对于血艳红均有一定增色效果，其中盐藻的增色效果最好。

3.2  不同藻源对血艳红慈鲷L*、a*、b*的影响

一般情况下，对血艳红慈鲷的体表红色是用肉眼来进行识别的，但当其红色差别不大时，很难有一个准确的评判，为了建立更好的分色评判系统，在测定血艳红慈鲷皮肤、鳍条和肌肉中类萝卜素的基础上，进一步对其体表红质L*、a*、b*数值做了相关测定。在姜志强等[10]和崔培等[11]对锦鲤的研究中发现，以螺旋藻和虾青素为着色剂，对锦鲤鱼体表红度a*值的增加都表现出了较好的效果。血艳红作为观赏鱼的一种，通常考察的是其红度值和亮度值，本试验裂壶藻组对血艳红体色表现出较好的促进作用，可能与其含有大量的DHA有关，宋建婷等[12]研究表明，類胡萝卜素作为一种脂溶性色素，必须以脂类为载体运输和吸收利用，若脂类含量不足，会影响到鱼体消化道对饲料原料中类胡萝卜素的吸收。只有保证有足够量的饲料油脂含量，才可有效保障鱼体对饲料中的色素物质的吸收。

3.3  不同藻源对血艳红慈鲷ACP和AKP活力的影响

ACP和AKP 在各种生物体内都大量存在，一方面其在体内营养物质的消化、吸收、运输中起着关键作用，另一方面还参与对磷酸酯进行水解，在机体消化代谢中起着关键作用[13]，同时还具有机体防御、免疫调节和很强的解毒效果[14]，作为溶菌酶的重要组成，其通过自身的水解作用清除体内异物[15]，它们的活性在一定水平上可以反映整个机体的免疫情况。黄亮华等[16]的研究表明裂壶藻能提高刺参的免疫机能。冯伟[17]的研究表明，裂壶藻可以提高对虾的免疫机能，在饲料中添加1%盐藻可显著提高血艳红肝脏中的AKP和ACP活性（P<0.05），说明盐藻具有提高血艳红免疫机能的作用，这可能与盐藻含有大量的β-胡萝卜素有关。高前欣[18]研究表明类胡萝卜素的抗氧化作用可有效地捕杀动物体内过量的活性氧和自由基，提高动物的非特异性免疫机能。

3.4  不同藻源对血艳红体内GOT和GPT活力的影响

转氨酶是催化氨基酸和酮酸之间氨基转移的一类酶，在生物体组织中普遍存在，GOT和GPT 是其中最重要的两种，是生命体正常生命活动不可缺少的酶，在生物体大多数物质代谢过程中有着非常重要的作用[19]。正常情况下，GOT和GPT在血清中活性极低，但当肝脏细胞受损或通透性改变后，血清GOT 和GPT的值就会升高，因此GOT和GPT是肝脏损伤的重要指示酶[19]。本试验中，盐藻组肝脏中GOT活力与其他各组无显著性差异，GPT活性显著高于对照组、裂壶藻组、小球藻组（P<0.05），这表明在饲料中添加一定量的盐藻可以平衡饲料中氨基酸的含量，使机体的氨基酸代谢维持在一个稳态，在一定程度上提高了氨基酸的吸收效果，减轻了血艳红慈鲷肝脏的负担。而3个藻组血清中GOT和GPT的含量均与对照组无显著差异，说明在饲料中添加一定量藻粉对鱼体肝脏没有造成负影响，这与张燕[20]研究结果一致。

4  结论

本试验通过在饲料中添加3种不同藻粉投喂血艳红慈鲷，研究结果表明，①在饲料中添加3种藻粉对血艳红慈鲷的生长没有明显的促进作用;②在饲料中添加1%盐藻能显著提高血艳红皮肤中总类胡萝卜素含量，饲料中添加1%裂壶藻能显著提高血艳红慈鲷体表红质a*值，说明这两种藻粉具有促进血艳红着色的作用（P<0.05）;③在饲料中添加1%盐藻可显著提高肝脏中的AKP、ACP和GPT活性（P<0.05），可促进鱼体肝脏的代谢机能;④饲料中添加裂壶藻、盐藻、小球藻对血艳红慈鲷的肝脏不会产生副作用。

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