外源性一氧化碳释放分子2对同种异基因皮肤移植小鼠T淋巴细胞亚群的影响

【摘要】 目的：运用流式细胞技术观察经过外源性一氧化碳CORM-2处理7 d的小鼠同种异基因皮肤移植模型受体小鼠脾脏淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的变化。方法：以清洁级ICR小鼠、BALB/C小鼠分别作为供体和受体建立异体皮肤移植模型，共分4组：1组假手术组，2组同种异基因皮肤移植组，3组同种异基因皮肤移植+CORM-2实验组，4组异体皮肤移+iCORM-2残液对照组，术后分别依据每组要求经尾静脉给药，共给药7 d，1次/d。于观察期结束时分别经心脏采集外周全血作流式细胞分析CD4+/CD8+。结果：经外源性CORM-2干预后的同种异基因皮肤移植模型的小鼠脾T淋巴细胞亚群（3组）CD4+/CD8+明显低于2组、4组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：外源性一氧化碳释放分子CORM-2对同种异基因皮肤移小鼠淋巴细胞功能有抑制作用。

【关键词】 一氧化碳； 皮肤移植； 淋巴细胞

中图分类号 R622.1 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2013）33-0129-02

Exogenous Release Carbon Monoxide Molecules to the Same 2 Allogeneic Skin Transplantation， the Effect of T Lymphocyte Subsets in Mice/SUN Zhi-wei，YIN Jiang-tao.//Chinese and Foreign Medical Research，2013，11（33）：129-130

【Abstract】 Objective：Imitation song dynasty style typeface using flow cytometry technique to observe treated with exogenous carbon monoxide CORM-2 same allogeneic skin transplantation in mice model of 7 d receptors in mice spleen lymphocyte subsets CD4+/CD8+ change.Method：Taking the SPF ICR mouse， the BALB/C mouse separately as the donor and the acceptor， establishing skin allotransplantation model， and dividing into 4 groups： group1 of sham-operation group， group 2 of skin allotransplantation group， group 3 of skin allotransplantation +CORM-2 group， group 4 of skin allotransplantation +iCORM-2 group.Result：T lymphocyte subgroup analysis with FCM indicates that the ratio of mice spleen CD4+T/CD8+T in group CORM-2（group 3） was lower than the control group（group 2 and 4） obviously.Conclusion：Exogenous release carbon monoxide molecules CORM-2 on the same allogeneic skin showed inhibitory effect on the function of lymphocyte in mice.

【Key words】 CO； Skin transplantation； Lymphocyte

First-author’s address：Affiliated Hospital of Jiangsu University，Zhenjiang 212001，China

研究证实一氧化碳（CO）与一氧化氮（NO）相类似，也是一种重要的气体细胞信使分子，在细胞功能调节方面发挥重要转导作用[1-2]。本实验通过一种外源性CO释放分子CORM-2（carbon monoxide-releasing molecules-2）干预同种异基因皮肤移植小鼠，研究其对同种异基因急性排斥反应发生时T淋巴细胞功能的影响。

1 资料与方法

1.1 动物模型的建立

实验动物选取清洁级ICR小鼠BALB/c小鼠各40只，体重（25±2）g（扬州大学比较医学中心提供），术前禁食24 h，正常饮水。以ICR小鼠作供体，SPF级BALB/c小鼠作受体建立小鼠背-背皮肤移植模型[3]，植入供体皮肤后加压包扎，腹腔注入2 ml林格氏液，单笼饲养。

1.2 方法

1.2.1 实验分组 将SPF级BALB/c小鼠随机分成4组，每组10只：1组自体皮肤移植对照组；2组同种异基因皮肤移植组；3组同种异基因皮肤移植+CORM-2实验组；4组同种异基因皮肤移植+CORM-2残液对照组。

1.2.2 给药方式与剂量 1组、2组自模型建立后仅单笼饲养，正常喂食；3组以DMSO溶解CORM-2，给药浓度8 mg/kg，尾静脉注射160 μl CORM-2稀释液；4组按照3组的方法配制稀释液，在室温下将稀释液敞开放置24 h后用氮气驱赶掉稀释液内的残余CO后则配成iCORM-2，每只小鼠尾静脉注射160 μl。所有给药自造模成功后即开始，均为7 d，1次/d。

1.3 流式细胞仪检测

实验第8天心脏采集小鼠外周血，取100 μl EDTA抗凝血加20 μl荧光单克隆抗体，同时做阴性对照[4]。避光室温作用20 min，以红细胞裂解液溶去红细胞后，固定剂固定。流式细胞仪测定，以阴性对照测出本底参数，设定阳性参数值，计算机将读出阳性值。

1.4 统计学处理

所得数据采用SPSS 10.0统计学软件进行处理，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

经外源性CORM-2处理的3组小鼠T淋巴细胞CD4+/CD8+较2组、4组有明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）。详见表1。

表1 各组小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+比较

组别例数（例）CD4+/CD8+

1组1027.07±3.31

2组10101.15±2.17

3组1081.15±3.51*

4组1097.73±2.24

*与2、4组比较，P<0.05

3 讨论

外源性一氧化碳释放分子CORM-2在器官移植中的生物学作用已逐步被认识[5]。一些研究也证实了外源性一氧化碳释放分子在脓毒症过程中也发挥着重要的信号转道作用[6-7]。发生排斥反应时，移植器官均可见凋亡的发生，通常由再灌注早期炎症反应所诱发。CO可抑制红细胞、肝细胞、胰岛细胞等多种细胞凋亡，在细胞因子诱导的调亡中，CO主要是通过P38MAPK途径起抗调亡的作用的[2]。

CD4+/CD8+比值最初是应用在AIDS的病情检测中。由于艾滋病病毒攻击对象是CD4+细胞，所以其检测结果对艾滋病治疗效果的判断和对患者免疫功能的判断有重要作用。当CD4+/CD8+降低到1.0以下时习惯称之为“倒置”，小鼠同种异基因皮肤移植后的急性排斥反应主要以单核细胞介导T淋巴细胞为主的细胞免疫为主要特点。其中T淋巴细胞的2个亚群CD4+/CD8+在反映移植免疫排斥的程度上已经得到一定的认识[4]。CD4+T属于是辅助性T淋巴细胞，是移植免疫应答过程中的主要细胞，而CD8+T为细胞毒性T淋巴细胞，在移植免疫应答过程中为效应细胞，起到一定调控免疫细胞的作用。CD4+/CD8+比值的升高与急性排斥的程度密切相关[8]，因而可以作为衡量排斥程度的一项重要指标。本实验运用外源性CO释放分子CORM-2干预同种异基因皮肤移植小鼠，其CD4+/CD8+较对照组有明显降低，说明外源性CO对同种异基因排斥反应时T淋巴细胞功能有一定抑制作用，为进一步研究CO这一气体信号分子的在抗免疫排斥中的作用增添佐证。

参考文献

[1]Suematsu M，Kashiwagi S，Sano T，et al.Carbon monoxide as an endogenous modulator of hepatic vascular perfusion[J].Biochem Biophys Res Commun，1994，205（5）：1333-1337.

[2]Brouard S，Otterbein L E，Aather J，et al.Carbon monoxide gene by heme oxygenase suppresses endothelial cell apoptosis[J].Ezp Med，2000，192（7）：1015-1026.

[3]王常慧，于艳秋，张海鹏，等.高压氧与雷公藤多甙对小鼠皮肤移植局部T淋巴细胞及其亚群和粘附分子表达的影响[J].中国实验方剂学杂志，2000，6（3）：46.

[4]吴晓晴，郝晨霞.160只小鼠心脏采血的操作体会[J].实验动物科学与管理，2004，12（1）：53-54.

[5]Tsui T Y，Wu X，Lau C K，et al.Prevention of chronic deterioration of heart allograft by recombinant adeno-associated virus-mediated heme oxygenase-1 gene transfer[J].Circulation，2003，107（1）： 2623-2629.

[6]孙炳伟，王敏，王波，等.外源性一氧化碳释放分子2对脓毒症小鼠血小板活化的影响[J].中华烧伤杂志，2011，27（2）：117-119.

[7]孙炳伟，王波，杨国涛，等.外源性一氧化碳释放分子2对急性肺损伤时肺部炎症反应的抑制作用[J].浙江大学学报（医学版），2010，39（5）：458-463.

[8]刘胜春，姚榛祥，孙正魁，等.HO-1在延迟性异种心脏移植排斥反应中的表达及意义[J].重庆医科大学学报，2005，30（5）：655-659.

（收稿日期：2013-06-26） （编辑：韩珊珊）

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