复合益生菌对昆明小鼠生长性能和肠道酶活性的影响

材料与方法

1.1菌株和培养基

纤维素酶产生菌B1-1和蛋白酶产生菌JC128 使用LB液体培养基培养，乳酸杆菌SL1-5 在MRS液体培养基上，37 ℃下培养24 h后达到稳定期。制备含有蜡样芽孢杆菌B1-1、蜡样芽孢杆菌JC128和乳酸杆菌SL1-5的培养物，且近似浓度达到1×108 CFU/mL或1×109 CFU/mL。使用LB和MRS培养基检测活菌数。

1.2试验动物及其饲养管理

40只健康的断奶昆明小鼠，雌雄各半，体重为13～15 g（平均体重为14 g），分成4笼，每笼10只小鼠。使用标准的实验室饲料饲喂小鼠，自由饮水。在试验期间维持光照和黑暗按照常态旋回，控制温度在（22±2）℃，湿度（55±2）%。

1.3试验设计

在试验条件下驯化小鼠24 h。每天补充饮用水，并更换饲料。毒物学研究持续10 d，而促生长试验持续14 d。尽管每天记录每只小鼠的体重，在试验末期也要留心观察小鼠毛发的光泽。在试验结束前，所有的小鼠都使用颈部脱臼致死。

1.4亚急性毒性试验

将40只小鼠随意分成4组，每组10只小鼠，并在试验开始前对每只小鼠进行称重。试验组Ⅰ小鼠饮用无菌蒸馏水，试验组Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的小鼠分别饮用浓度1×108 CFU/mL 或1×109 CFU/mL的菌株B1-1、JC128和SL1-5的菌悬液，通过针管（长5 cm，直径3 mm）灌胃，每天3次，持续10 d （ 3×108 CFU/d或3×109 CFU/d） 。每天记录试验小鼠的生长和死亡情况，观察每只小鼠脏器的肉眼病理学特征。取小鼠的脾和肝，并精确称重。

1.5复合益生菌制剂

蜡样芽孢杆菌B1-1、蜡样芽孢杆菌JC128在LB培养基上培养，乳酸杆菌SL1-5在MRS培养基中生长，37 ℃下培养24 h，以获得稳定期。离心分离后获得菌株，使用无菌水洗涤2次，悬浮1次。乳酸杆菌SL1-5的接种物浓度约1×108 CFU/mL或1×109 CFU/mL。

通过口腔灌胃的方法，每天给小鼠饲喂浓度为1×108 CFU/mL或1×109 CFU/mL复合益生菌制剂，持续14 d。试验动物饲喂标准的实验室饲料，自由饮水。对照组动物饮用无菌的蒸馏水。

1.6生长性能评价

每天使用电子天平（Sartorius BP2100）称量试验动物的体重。增重为每只小鼠的最终体重减去最初体重的平均值。比生长速率（SGR）反映小鼠的生长速率。每天每笼饲料摄取（FI）及水摄取可以表示为每个动物在整个时期分配饲料或水消耗除去动物的数目。消耗指数等于FI与WG的比值。

1.7肠道酶活力的测定

剥离出各个片段粗糙的肠混合物于4 ℃下保存。分离肠的样品用冷蒸馏水漂洗。蛋白酶活力的测定参照Lowry等[11]的方法，采用福林-酚法；纤维素酶活力的测定依据Lungisa等[12]和Zhou等[13]的方法。

1.8数据统计与分析

使用SPSS 16.0统计软件对试验数据进行Duncan’s多重比较和ANOVA方差分析。P<0.05表示差异显著。

2结果与分析

2.1亚急性毒性试验

整个试验期间，试验动物没有腹泻、疾病或死亡。在试验期末，所有饲喂细菌的小鼠都活着且是健康的。然而，处理组和对照组试验动物的毛发光泽没有明显的差异。处理组小鼠毛发光滑且洁白。

从图1可以看出，饲喂不同细菌和水对小鼠的肝重/体重、脾重/体重、脾重/肝重没有显著影响（P>0.05）。

2.2生长性能

从图2可以看出，饲喂复合益生菌制剂的小鼠体增重比对照组明显增加。考虑到试验结果，在后来的试验中选择大麦饲料和清洁的复合益生菌。

使用最佳剂量（108 CFU复合益生菌制剂）来研究小鼠的生长性能。从图3可以看出，饲喂复合益生菌剂的小鼠体增重较仅摄取水有较大提高。试验期内，处理组饲喂复合益生菌制剂的小鼠体增重较对照组提高了28%。未经处理小鼠的消耗指数达到2.64，而饲喂复合益生菌制剂处理组小鼠的消耗指数达到1.2。

由此可见，饲喂复合益生菌制剂和水的小鼠体增重没有显著差异。饲喂复合益生菌制剂和水的小鼠的消耗指数也没有显著差异。

2.3肠道酶活性

由表1可知，B1-1菌株对小鼠肠道内的纤维素酶活有一定的促进效果，JC128菌株对蛋白酶活有一定的促进效果。B1-1和JC128菌株混合饲喂，纤维素酶活和蛋白酶活的升高幅度最大，与对照组相比小鼠CMC酶、FPA酶和蛋白酶活性分别升高了48.70%、30.15%和30.23%。此外，B1-1菌株还具有蛋白酶活性，JC128菌株具有纤维素酶活性，且并非单纯的加减作用。究其原因，可能是因为2种菌存在协同效应，B1-1菌株丰富的代谢产物刺激JC128菌株生长，JC128菌株生长耗氧创造适宜B1-1菌株生长的厌氧环境，从而2菌种均大量生长，酶活较高。

3结论

由蜡样芽孢杆菌B1-1、蜡样芽孢杆菌JC128和乳酸杆菌SL1-5制备的复合益生菌安全性较好，且对小鼠的生长性能有促进作用。该研究结果表明饲喂108 CFU益生菌细胞可以显著提高小鼠的体重。此外，复合益生菌制剂能够显著提高小鼠的消化能力、饲料利用率和肠道内酶活力。

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