Ki67\nm23基因在鼻咽癌中的表达及其意义

[作者简介] 韦祝新，女，肿瘤学硕士，广西医科大学第一附属医院放疗科主治医师；研究方向：鼻咽癌的临床与基础研究。

[通讯作者] 李萍，女，耳鼻喉专业博士，广西医科大学第一附属医院病理科副教授。

[摘要] 目的：研究Ki67、nm23基因在鼻咽癌的表达以及同鼻咽癌临床分期、远处转移等的关系。方法：对66例鼻咽癌标本应用免疫组化法研究Ki67、nm23基因的表达情况。在66例中，33例有远处转移（有远处转移组），33例无远处转移（无远处转移组），其中，46例有颈淋巴结转移，20例无颈淋巴结转移。结果：①从Ki67表达水平来看有远处转移组的鼻咽癌组织明显高于无远处转移组(z=-5.395，P<0.001)，而nm23 的表达明显低于无远处转移组(z=-3.866，P<0.001)；②Ki67的表达与临床分期呈正相关(r=0.268,P<0.05); nm23 的表达与临床分期呈负相关（r=-0.246，P<0.05）； ③Ki67和nm23 的表达与T分期无明显关系(分别为r=0.171、-0.130，均P＞0.05)；④Ki67、nm23的表达在有无淋巴结转移组无明显差异(z=-1.498、-0.901，P＞0.05)；⑤Ki67与nm23 的表达呈负相关(r=-0.327,P<0.05)。结论：Ki67、nm23表达的增高和降低很可能是鼻咽癌的远处转移的因素之一；Ki67与nm23表达的高低与鼻咽癌的临床分期有关, 在预后评估中Ki67、nm23表达的高低很有可能是重要的参考指标。

[关键词] nm23基因；Ki67基因；鼻咽癌；远处转移

[中图分类号] R739.6[文献标识码]Ａ [文章编号]1673-7210（2011）08（a）-005-03

Expression and significance of Ki67 and nm23 gene in nasopharyngeal carcinoma

WEI Zhuxin1, LI Ping2, WANG Rensheng1, GAN Langge1, GAN Mei1

1.Department of Radiotherapy, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530021, China; 2.Department of Pathology, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530021, China

[Abstract] Objective: To explore the expression of Ki67 and nm23 genes in nasopharyngeal carcinoma and the relationship of the clinical stages and the distant transfer in nasopharyngeal carcinoma. Methods: 66 cases with nasopharyngeal carcinoma were divided by immunohistochemical method specimen to explore the expression of Ki67 and nm23. There were half cases with distant transfer, and the other had not. There were 46 cases with head and neck squamous cell carcinoma and only 20 cases with no transfer. Results: ①The expression level of Ki67 in nasopharyngeal carcinoma group with distant transfer is obviously higher than the group without distant transfer (z=-5.395，P<0.001), the expression level of nm23 in distant transfer group was less than no distant metastasis group (z=-3.866，P<0.001);②the expression and the clinical stages of Ki67 were positively related (r=0.268, P<0.05); the expression and the clinical stages of nm23 were negative correlation(r=-0.246, P<0.05);③the expression of Ki67and nm23 and the stages of T were no significant relationship(r=0.171, -0.130， P＞0.05); ④the expression of Ki67and nm23 without lymph node metastasis had no obviously different between two groups(z=-1.498，-0.901, P<0.05);⑤the expression of Ki67 and nm23 were negative correlation (r=-0.327, P<0.05). Conclusion: The distant transfer and the clinical stages of nasopharyngeal carcinoma may lead to the expression ofnm23 and Ki67 increasing and reducing. The expression ofKi67 and nm23 is the important factors in prognosis assessment.

[Key words] Nm23 gene; Ki67 gene; Nasopharyngeal carcinoma; Distant transfer

肿瘤转移是肿瘤的恶性标志和特征，也是肿瘤患者治疗失败和死亡的重要原因，涉及到一系列复杂的问题，如肿瘤脱离母体，侵袭周围组织进入血液循环系统，在远处种植，逃离免疫监视，形成转移性肿瘤。肿瘤的转移有很多方面的原因，它是一个复杂的过程，且由很多因素、步骤和基因共同作用。要做到对肿瘤治疗和预防其转移，需深入地研究与肿瘤有关的基因。研究表明Ki67是一种与周期相关的基因[1]，nm23基因具有调控转移抑制的作用。肿瘤的发生、发展、分期、浸润、转移多与其表达相关[2-3]。据调查我区是鼻咽癌的高发地区之一，预防和治疗鼻咽癌时Ki67、nm23基因的表达对其有重要的指导作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院放疗科1994～2001年治疗的鼻咽癌患者66例，其中，男53例，女13例；年龄最大85岁，最小25岁，平均（42.28±13.15）岁；有远处转移和无远处转移的患者分别为33例；临床分期：Ⅰ期1例，Ⅱ期18例，Ⅲ期31例，Ⅳ期16例；在所有患者中，46例有颈淋巴结转移，20例无颈淋巴结转移；病理分型：65例为低分化鳞状细胞癌，1例为鳞状细胞癌2级。

1.2 主要试剂

兔抗人单克隆抗体nm23，免疫组化二步法试剂盒（KIT-9801）、单克隆抗体（即用型MAB-0129），鼠抗人Ki67、L多聚赖氨酸（GLU-0040）。进行苏木精-伊红染色切片组织学证实。

1.3 方法

通过门诊进行复查、查看病历、电话或信件调查等方式，收集符合标准的病例。纳入标准：在我院放疗科进行的第一次放射治疗，这些患者必须由我院完成其鼻咽部的病理活检及病理诊断并且保存有原始病理组织蜡块。在治疗前已完成对鼻咽部得CT扫描检查，存在有T、N、M的原始分期，放疗量为NPDT 6 800~7 200 CGy，未进行化疗。阳性对照采用已知的阳性片， 空白对照采用PBS代替一抗，组织学参照可运用苏木精-伊红染色。

1.4 结果判定标准

Ki67表达阳性的判定：对细胞核着色时呈现棕黄颜色，在显微镜下观察，常选取5个高倍镜视野，在每个高倍镜视野下对100个肿瘤细胞进行观察，阴性判断标准为总的阳性率＜5%，判断为“+”的标准为阳性率在5%~20%之间，判断为“++”时阳性率应在21%~40%之间，判断为“+++”需满足阳性率在41%~75%之间，＞75%判定为“++++”。nm23表达阳性的判定：胞浆着色，判定标准同Ki67，鼻咽癌分期采用92福州TNM分期法。

1.5 统计学方法

用SPSS 13.0统计软件对数据进行统计分析，采用秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

Ki67、nm23的表达均与年龄、性别无关。鼻咽癌伴远处转移组中,Ki67的表达明显高于无远处转移组（z=-5.395,P<0.001），而nm23 的表达明显低于无远处转移组（z=-3.866，P<0.001）。Ki67表达随临床分期的增高而增高，呈正相关（r=0.268，P=0.029<0.05）。Nm23的表达随临床分期的增高而降低，呈负相关（r=-0.246，P=0.040<0.05）。Ki67和nm23的表达与T分期无相关性（r=0.177、-0.130，均P＞0.05）。Ki67、nm23的表达在有无淋巴结转移组中差异均无统计学意义（z=-1.498、-0.901）。Ki67与nm23 的表达呈负相关（r=-0.327，P=0.007）。见表1。

3 讨论

Ki67、nm23基因是学者们近年研究得较多的癌基因，在很多医院病理科对乳腺癌、肝癌等作常规检测，对鼻咽癌尚需进一步循证。在人体内Ki67基因位于10q25（ter）上，研究显示有丝分裂活动与它有紧密的关系，除G0期以外它表达于细胞周期中的其他所有时期，Ki67蛋白在有丝分裂完成后迅快降低溶解。Ki67是双链的分子结构，只在增殖的细胞表达。其高表达是细胞增殖活跃的重要标记，对肿瘤的转移及预后有影响。Ki67的表达作为反映肿瘤恶性程度的指标早已被很多学者公认。Nm23基因是Steeg等在筛选7个k-1735 小鼠黑色素瘤细胞株时，用消减杂交法分离到的能抑制转移的CDNA 的克隆，这一克隆即nm23。它定位于17q21.3，编码17KD 蛋白。其表达水平与肿瘤的侵袭性和转移倾向均有相关，其主要功能：①抑制细胞微管系统异常聚合，防止减速分裂时纺锤体异常，而导致的非整倍体肿瘤细胞形成，同时可降低肿瘤细胞的侵袭性和转移能力；②阻断G蛋白介导的生长信号传导，从而抑制肿瘤细胞的生长[4]，很多学者认为它是反应肿瘤预后良好的指标。

3.1 Ki67、nm23表达与临床因素的关系

根据国内外的研究[2，5]，肿瘤的生存、复发、增生、浸润、转移等与Ki67的表达有很重要的关系。根据Cher的研究得出：Ki67的表达和前列腺癌同时伴随骨转移有关,在发生骨转移的患者中Ki67的表达较高 [6]。nm23 的低表达与肿瘤的发生、发展、转移、预后有关[7]。笔者的研究亦显示：鼻咽癌中Ki67和nm23的表达在有远处转移组和无远处转移组中有显著差异 (P<0.001)，远处转移组中Ki67高表达而nm23低表达。由于Ki67高表达和nm23低表达者容易发生远处转移，因此检测鼻咽癌患者病理标本的Ki67、nm23，可以预测患者发生远处转移的可能性,这对临床干预和靶点药物的研制提供有益的思考的方向。

国内外很多学者认为Ki67、nm23 的表达与肿瘤临床分期相关，Zheng等[4]的研究结果指出Ⅲ、Ⅳ期鼻咽癌组织中Ki67的表达明显高于Ⅰ、Ⅱ期的癌组织(P<0.05)。国内研究亦得出类似结果[2]。Hailat 等[6]发现nm23 蛋白表达水平与神经母细胞瘤的分期呈负相关。有一些学者持有自己的观点，Roland等[7]认为,头颈肿瘤的分期与Ki67的表达无必然的联系。Oretti等[9]认为：nm23的表达与非小细胞肺癌的临床分期无关, 本组资料显示鼻咽癌组织中Ki67的表达与临床分期呈正相关(r=0.268，P=0.029<0.05)，nm23的表达与临床分析呈负相关（r=0.246，P=0.040<0.05）。这对临床实践具有指导作用，而笔者的病例数少，有待进一步循证。

有研究显示：Ki67表达与一些原发病灶的大小成正比，比如黑色素瘤[10]，Ki67表达与其原发灶的大小呈正相关。鼻咽癌的特点有,发生部位较隐蔽,肿瘤所在的地方空间很小,周围腔隙多,很难准确地计算原发病灶的大小。原发灶的情况在某种程度上可以通过鼻咽癌T分期来反映。本文研究表明：Ki67、nm23的表达与T分期无明显相关（P>0.05），与国内部分学者的研究结果类似 [11-12]。分析其原因可能有：①在进行CT扫描时，鼻咽图像和NPC病灶范围没有完全相吻合,从而导致了原发病灶不能真实的反映；②收集的病例数少；③远处转移病例在总病例中占的比例较高；④在进行肿瘤恶性程度的评判时会涉及诸多问题，肿瘤的恶性程度无法用单纯而简单的T分期来说明；⑤可能与鼻咽癌92分期中T分期的不合理有关。目前临床已广泛采用经大量回顾性研究及MRI图象扫描为基础的08分期。

关于局部淋巴结的转移，大部分学者认为与Ki67、nm23的表达有关。有淋巴结转移者Ki67的表达率高[13]，无淋巴结转移者nm23的表达率高。本组资料中Ki67、nm23的表达与有无淋巴结转移在统计学上无明显意义。可能的原因有：①采集的病例数少；②总病例数中，远处转移患者在总病例中占有很高的比例；③鼻咽癌92 分期中N分期的不合理性；④其他未知原因。

3.2总结

本研究中Ki67 nm23的表达与有无远处转移有关、与临床分期有关而与单独的T、N分期无关[Ki67的表达与临床分期呈正相关（r=0.268，P<0.05），nm23的表达与临床分期呈负相关（r=-0.246，P=0.040<0.05）]，是因为总分期比单独的T、N分期更能反应肿瘤的特性。其二者的表达呈负相关，说明二者联用能更好地反应肿瘤的增殖浸润和转移特性。这个论点一旦成立将对临床实践具有指导作用，值得我们进一步思考和研究。

总之，本研究表明在转移的鼻咽癌患者中，Ki67蛋白表达增高非常明显, 而nm23的表达降低非常明显，提示其癌组织的生物学行为较为凶险，预后较差，其二者的表达呈负相关，其间的关系尚未完全明了，值得我们从多技术、多角度进一步研究。

[参考文献]

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[7]Roland NJ, Caslin AW, Bowie CL, et al. Has the cellular proliferation marker Ki67 any clinical relevance in squamous cell carcinoma of the head and neck [J]. Clin Otolaryngol,1994,19(1):13-18.

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[11]刘宇龙,刘宜敏,徐凯,等.CerbB2、nm23、VEGF在鼻咽癌中的表达及意义[J].中华临床医学研究杂志,2005,11(13):1821-1823.

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[13]Kantak SS, Kramer PH. E-Cadherin regulates anchorage-independent growth and survival in oral squamous cell carcinoma cells [J]. J Biol Chem,1998,273(27):16953-16961.

（收稿日期：2011-06-29）

[基金项目] 广西壮族自治区卫生厅医疗卫生科研课题（课题名称：鼻咽癌组织Ki67基因的表达与外周血OK、NK的关系及临床意义；合同号：Z2003052）。

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