PCNA和CD44v6在鼻咽癌组织中的表达及其相互关系

[摘要] 目的：研究PCNA和 CD44v6在鼻咽癌的表达及其相互关系。方法：应用免疫组化S-P法检测 23例慢性鼻咽炎、62例鼻咽癌组织（38例伴有淋巴结转移）中PCNA和 CD44v6的表达。结果：62例鼻咽癌组织PCNA和CD44v6阳性表达率分别为69.3%、77.4%，与23例慢性鼻咽炎PCNA、CD44v6阳性率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。鼻咽癌转移组和非转移组PCNA的阳性率分别为68.4%、70.8%，差异无统计学意义（P＞0.05）；转移组CD44v6阳性率要高于非转移组，阳性率分别为89.4%、58.3%，差异有统计学意义（P＜0.05）。PCNA和CD44v6共同阳性表达有39例，共同阴性表达10例，两者表达呈正相关（r=0.436， P＜0.01）。结论：PCNA和 CD44v6在鼻咽癌组织中存在高表达，在鼻咽癌的发生、发展中起着重要作用。

[关键词] 鼻咽癌；PCNA；CD44v6；转移

[中图分类号] R739.6[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2010）10（a）-016-03

The expression of PCNA and CD44V6 in nasopharyngeal carcinoma and their relationship

CAI Liangzhen, ZHI Meifen, HE Wenyan

(Department of Oncology, the Affiliated Hospital Guang Dong Medical College, Zhanjiang 524000, China)

[Abstract] Objective: To investigate the expression of PCNA and CD44v6 in nasopharyngeal carcinoma (NPC) and their relationship． Methods: the expression of PCNA and CD44v6 were detected in 23 cases chronic nasopharyngitis and 62 NPCs (38 cases with lymph node metastases) by S-P immunohistochemical method． Results: The positive expression rates of PCNA and CD44V6 were 69.3% and 77.4% in 65 NPCs，showing statistical difference from those of 23 cases chronic nasopharyngitis (P＜0.05). The positive expression rates of PCNA in metastasis group and non-metastasis group were 68.4%，70.8%, there was no statistical significance(P＞0.05); The positive expression rates of CD44v6 in metastasis group and non-metastasis group were 89.4%,58.3%,there was statistical significance (P＜0.05)． PCNA and CD44V6 were expressed positively in 39 cases，while being expressed negatively in 10 cases, showing positive correlation between them（r=0.436, P＜0.01）． Conclusion: PCNA and CD44v6 is high expression in NPCs, playing important roles in the occurrence and development of NPC．

[Key words] Nasopharyngeal carcinoma; PCNA; CD44v6; Metastasis

研究鼻咽癌浸润与转移的分子机制，确定鼻咽癌转移的分子标志物，对鼻咽癌的诊断与治疗有着深刻的意义[1]，增殖细胞核抗原(PCNA)和 CD44v6在鼻咽癌组织中存在高表达，在鼻咽癌的发生、发展中起着重要作用。

PCNA是一种36kD的酸性核蛋白，为DNA 聚合酶δ的辅因子，主要在G1早期和S后期诱导DNA的合成，与细胞增殖状态密切相关，可以准确反映细胞的增殖活性[2-3]。CD44v6 是一种分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，属于细胞表面黏附分子，主要参与肿瘤细胞与细胞外基质的黏附过程，与恶性肿瘤的侵袭和远处转移密切有关[4-6]。有关 PCNA、CD44v6 在鼻咽癌组织中的表达关系，目前较少文献报道。本文采用免疫组化方法检测PCNA 和CD44v6 在鼻咽癌组织的表达，探讨两者在鼻咽癌发生、发展和转移中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

收集广东医学院附属医院病理科2007年1月～2008年12月石蜡标本85例，慢性鼻咽炎23例，鼻咽癌组织62例（均诊断为鼻咽非角化性癌），其中鼻咽癌组织中38例伴有颈部淋巴结转移，男38例，女24例；年龄21～75岁，中位年龄43岁。送病理前所有患者均未接受过任何放疗和化疗，有完整的临床和病理资料。

1.2 试剂

鼠抗人PCNA单克隆抗体、鼠抗人CD44v6单克隆抗体、S-P免疫组化试剂盒及 DAB底物显色剂均购自北京中杉生物公司。PCNA工作浓度为1∶50，CD44v6抗体工作浓度为1∶100。

1.3 方法

所有标本经4%多聚甲醛液固定，石蜡包埋，3 μm连续切片。按S-P试剂盒进行操作。蜡切片脱蜡、梯度水化，高压抗原修复后室温冷却，3%过氧化氢孵育 20 min，PBS冲洗2×10 min，滴加正常羊血清室温孵肓20 min；滴加1∶100比例稀释的PCNA和CD44v6抗体，置于4℃冰箱过夜；滴加 1∶100生物素标记的二抗，室温孵肓15 min，滴加 1∶100辣根过氧化物酶标记的卵白素，室温孵肓 15 min，PBS冲洗2×10 min，DAB充分显色，苏木素复染，自来水返蓝，室温干燥后中性树脂封片。PBS代替一抗作为阴性对照。

1.4 结果判断

PCNA主要表达于细胞核，CD44v6表达位于细胞膜，部分细胞质也见表达，呈棕黄色或棕褐色颗粒样分布。采用双盲法，根据棕黄色阳性信号的强弱和面积进行判断：（-）为阳性染色细胞＜5%；（+）为阳性染色细胞数＜20%，染色淡黄，（+ +）为阳性细胞数20%～50%，染色黄色；(+ + +)为阳性细胞数 ＞50%，染色黄至棕黄色。（+）～（+ + +）均为阳性表达。

1.5 统计学方法

采用SPSS 11.5 统计学软件做四格表的χ2检验，Spearman 等级相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 慢性鼻咽炎和鼻咽癌组织中PCNA和CD44v6的表达

PCNA在鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎的阳性率分别为69.3%（43/62）、21.7%（5/23），两者差异有统计学意义（P＜0.05）。鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎CD44v6的表达率分别为77.4%（48/62）、17.3%（4/23），差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 鼻咽癌转移组和非转移组中PCNA和CD44v6的表达

鼻咽癌转移组和非转移组PCNA的阳性率分别为68.4%（26/38）、70.8%（17/24），差异无统计学意义（P＞0.05）。鼻咽癌非转移组CD44v6表达阳性率为58.3%（14/24），而转移组CD44v6表达逐渐增强，阳性表达率为89.4%（34/38），差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 鼻咽癌组织中PCNA和CD44v6的表达相关性

在 62例鼻咽癌中，PCNA和CD44v6表达共同 49例，其中共同阳性39例，共同阴性 10例；表达不一致者13例，PCNA阳性而CD44v6阴性4例，PCNA阴性而 CD44v6阳性9例。经 Spearman等级相关分析，PCNA和CD44v6表达呈正相关（r=0.436， P＜0.01）。见表3。

3 讨论

PCNA基因位于第20号染色体上，含946个碱基对，其编码蛋白即PCNA。PCNA是一种细胞周期调控蛋白，相对分子质量为（33～36）×103，是细胞内DNA合成必不可少的因子。PCNA的合成与表达与细胞增殖周期有关，在G0期含量很少，G1 晚期逐渐增加，S期达高峰，G2和 M 期明显下降。PCNA的过表达在不少恶性肿瘤均有报道，被认为是判断肿瘤细胞增殖的主要指标之一[7-8]。本研究表明，PCNA在鼻咽癌组织的阳性率为69.3%，明显高于其在慢性鼻咽炎的表达（21.7%），这说明了PCNA的表达升高参与了鼻咽癌细胞的恶性转化。有学者认为，PCNA的表达可以促进肿瘤发生淋巴道及远处转移，与患者的预后密切相关[9-10]。笔者分析了PCNA在鼻咽癌转移组和非转移组中的表达情况，结果发现两组PCNA的表达强度和阳性率并无明显差异（P＞0.05），因此，PCNA在鼻咽癌淋巴道转移中的作用有待于进一步的研究。

侵袭与转移是恶性肿瘤最本质的特征，与细胞间黏附分子表达的改变密切相关。CD44v6是CD44的一种拼接变异体，主要介导细胞与基质之间的黏附和迁移，其表达升高使到基质细胞间的黏附能力增强，促进了肿瘤细胞的运动和侵袭。目前有关 CD44v6在鼻咽癌的研究不是很多，且存在一定的争议。谷化平等[11]采用原位杂交方法检测到CD44v6 mRNA在鼻咽癌淋巴结转移灶高表达，并与放疗或手术后复发转移率密切相关，而Huang GW等[12]报道CD44v6与鼻咽癌的淋巴道转移关系不大，转移组和非转移组中表达差异不明显。本研究发现，鼻咽癌组织和鼻咽炎中CD44v6阳性表达率分别为77.4%、17.3%，差异有统计学意义（P＜0.05）。鼻咽癌转移组CD44v6阳性表达明显高于非转移组，这说明了CD44v6的表达提高了肿瘤细胞与细胞外基质的黏附能力，肿瘤细胞的运动和侵袭力得到增强，促进了鼻咽癌的淋巴道转移。

目前研究表明，至少有两种或以上功能不同的基因异常激活，协同促进了肿瘤细胞的癌变。PCNA 和 CD44v6在鼻咽癌的表达关系如何，目前尚未见相关报道。本研究发现，在鼻咽癌组织中PCNA阳性表达有较高的CD44v6表达，CD44v6的表达随着PCNA的表达增高而逐渐增高，两者表达呈正相关（r=0.436，P＜0.05）。提示PCNA与CD44v6呈正调控关系，两者共同参与了鼻咽癌的发生和发展。然而这仅是我们初步的免疫组化结果，两者确切的分子调控机制有待进一步的研究。

综上所述，鼻咽癌组织中存在PCNA 和 CD44v6的高表达，两者之间表达呈正相关。检测PCNA和CD44v6水平对鼻咽癌的分化、淋巴道转移方面具有一定的临床意义，有可能作为判断鼻咽癌患者预后的一种有效指标。

[参考文献]

[1]苏沛珠,黄泳.鼻咽癌转移相关分子标志物的研究进展[J].中国现代医生,2009,47(3):50-52.

[2]Wasko R, Waligorska-Stachura J, Jankowska A, et al． Coexpression of survivin and PCNA in pituitary tumors and normal pituitary [J]. Neuro Endocrinol Lett,2009,30(4):477-481．

[3]Ruksha TG, Salmina AB, Sokolov VD, et al． Expression of peripheral benzodiazepine receptor, PCNA, and caspase-3 in cells of skin melanoma and squamous cell carcinoma [J]． Bull Exp Biol Med, 2007,144(1):77-79．

[4]Miyasaka Y, Nagai E, Ohuchida K, et al． CD44v6 expression in intraductal papillary mucinous neoplasms of the pancreas [J]. Pancreas, 2010,39(1):31-35.

[5]Liu WK, Fu Q, Li YM, et al． The relationship between cyclooxygenase-2, CD44v6, and nm23H1 in esophageal squamous cell carcinoma [J]. Onkologie,2009,32(10):574-578.

[6]付根学.CD44V6与恶性肿瘤[J].中国现代医生,2010,48(12):11.

[7]Hervouet E, Lalier L, Debien E, et al． Disruption of Dnmt1/PCNA/UHRF1 interactions promotes tumorigenesis from human and mice glial [J]. PLos One,2010,5(6):e11333.

[8]朱秀梅,钟良清.MCM5和PCNA在鼻咽低分化鳞癌中的表达及意义[J].中国当代医药,2009,16(18):36-38.

[9]Dirim A, Haberal AN, Goren MR, et al． Tekin MI, VEGF, COX-2, and PCNA expression in renal cell carcinoma subtypes and their prognostic value [J]． Int Urol Nephrol,2008,40(4):861-868．

[10]Shen SQ, Li K, Zhu N, et al． Expression and clinical significance of NET-1 and PCNA in hepatocellular carcinoma [J]. Med Oncol, 2008,25(3):341-345.

[11]谷化平,刘艳茹,倪灿荣．鼻咽癌组织中CD44v6 mRNA 及其蛋白表达的临床意义[J]．实用癌症杂志,2002,17(2):145-147．

[12]Huang GW, Mo WN, Kuang GQ． Expression of p16, nm23-H1, E-cadherin, and CD44 gene products and their significance in nasopharyngeal carcinoma [J]. Laryngoscope,2001,111(8):1465-1471．

（收稿日期：2010-08-03）

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