短时受精中保留卵丘细胞对临床结局的影响

总结与分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院患者年龄（31.3±3.5）岁，不孕年限≤3年因输卵管因素或盆腔炎症接受IVF助孕的不孕患者共169个周期，≥5获卵数≤16枚。根据有无卵丘细胞分组，实验组2组：全部卵丘A组65个周期；部分性卵丘B组54个周期；对照组：无卵丘细胞C组50个周期；剔除全卵不受精和受精率低下的周期。在体检时和取卵当日所有男方的精液在显微镜下检查在体检时和取卵当日在显微镜下观察均提示显示正常。

1.2 方法

①控制性超排卵和精液处理均应用该院的方案[2]。②卵丘细胞处理：均于授精后4～6 h。 A组：将受精卵转移至已平衡的卵裂培养基继续培养；B组，观察受精卵第二极体是否排出，如成熟卵细胞双极体≥全部卵子数目50%则初步判断为受精良好（如卵子数较多，以一个皿为例），与其他剩余受精卵保留卵丘细胞一同转移至已平衡的卵裂培养基继续培养；C组全部去除卵丘细胞，观察双极体后，将受精卵转移至已平衡的卵裂培养基继续培养。三组均于受精后18～19 h观察3组受精情况，正常受精标准：见到可观察到2个清晰原核。③胚胎评分及胚胎移植：48～72 h对进行胚胎质量评估进行，根据卵裂球形态与大小、无碎片量及分布、细胞浆均质情况等进行胚胎评分[3]，根据患者的年龄及和IVF次数来选择2～3枚优质胚胎在B超引导下行宫腔内移植，并将剩余的利用胚胎冷冻保存将剩余胚胎。胚胎移植胚胎后14 d后检测尿、血β-HCG，若为阳性，4周后行B型超声检查，见到孕囊和胎心搏动则判定为临床妊娠。

1.3 统计方法

采用SPSS11.0软件包进行分析，计量资料行t检验，计数资料行χ2检验。

2 结果

如表1结果显示：A组卵子数（10.86±4.52）个，B组卵子数（11.31±4.47），C组卵子数（10.53±4.63）个，A组、B组和C组在卵子数、2PN率、优胚率的结果比较差异无统计学意义（P>0.05）；≥3PN率：C组>B组>A组，11.41%vs5.73%vs3.46%，C组与A组、B组结果比较均差异有统计学意义（P<0.05）；胚胎利用率：B组>A组>C组，68.28%vs 60.47%vs57.14%，B组较C组：68.28%vs57.14%，差异有统计学意义（P<0.05）；临床妊娠率：B组>A组>C组，50.0%vs44.62%vs38.0%。B组较C组：50.0%vs38.0%，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

卵丘细胞是包裹在卵母细胞周围的颗粒细胞层为卵丘细胞，它其与卵母细胞之间存在广泛的包括缝隙连接在内的细胞间复杂的连接机制，起着具有调节卵母细胞发育的重要作用。卵丘细胞一方面将运输营养物质运输给卵母细胞，同时也是作为激素、生长因子等多种物质对卵母细胞发挥作用的介质。

多原核合子是IVF 过程中的正常现象，其发生率为 2% ～ 10%。文献提示多原核高比例发生在<37岁的患者中，可能预示本周期卵子质量较好，能获得理想的 IVF 结局[4]。该文结果显示：无卵丘细胞的C组多原核合子比例明显高于有卵丘细胞的A、B组：11.41%vs5.73%vs3.46%， 结果比较均差异有统计学意义（P<0.05）； 而有部分剥脱的卵丘细胞的B组多原核合子比例，又高于有完整卵丘细胞的A组：5.73%vs3.46%，结果比较并差异无统计学意义（P>0.05）；提示：短时受精中，机械法拆除卵丘细胞，使卵母细胞与周围的卵丘细胞及其分泌因子分离，脱离了卵丘细胞存在的微环境，对卵母细胞的成熟、受精产生不利影响，容易造成透明带损伤，增加多精入卵的几率，导致多原核比例增高。

卵丘细胞的保留与否，相关不同研究有不同的结论不同。张丽红等[5]的研究表明，短时受精后脱去卵丘细胞的优质胚胎率比高于未脱去卵丘细胞组高，而保留卵丘细胞组与对照组无显著统计学差异；而李蕾等[6]的研究显示表明，脱离了高精子密度而未脱落的卵丘细胞可能作为共培养细胞，可分泌一些对有利于早期胚胎发育的有利的物质，如生长因子、糖蛋白、氨基酸等。该文该研究显示：有卵丘细胞A组与B组胚胎利用率与临床妊娠率均高于无卵丘细胞C组，分别为：68.28%vs60.47%vs57.14%；50.0%vs44.62%vs38.0%。B组较C组两种比率均差异有统计学意义（P<0.05）。提示：保留卵丘细胞能增加短时受精中卵母细胞受精的后续发育能力，发挥调节胚胎发育的作用，提高胚胎利用率和临床妊娠率。

有相关文献报道称：，应用颗粒细胞部分剥除法对可以促进早期胚胎的体外发育有促进作用，克服解除体外发育过程中的阻断，使增加可发育到囊胚期的胚胎数量增加，提高使胚胎着床率提高[7]。该文结果该研究显示：有卵丘细胞的B组与A组比较，各个实验结果虽无差异性，但却有提高的趋势。部分性剥脱卵丘细胞B组，优于过夜培养不观察极体的有卵丘细胞的A组，提示：部分性剥脱卵丘细胞，既能有效的观察受精状况，规避了受精失败或低下的风险，又延续了卵丘细胞特有的营养调节作用，保证了胚胎的质量。

综上所述，短时受精中，在保证受精的状况下，保留或部分性保留卵丘细胞，能防止多精受精，提高胚胎质量，获得较好的临床结局，值得临床应用和推广。

[参考文献]

[1] 甄碌然.三种颗粒细胞剥除方式对卵母细胞受精率及胚胎发育的影响[J].生殖医学杂志， 2008，17（1）： 20-23.

[2] 王娟.精液优化后置时间与受精时间对胚胎质量的作用评价[J].中国优生与遗传杂志， 2010， 18（10）： 110-111.

[3] 王一飞.人类生殖生物学[M].上海： 上海科学技术文献出版社，2005：323-324.

[4] 徐志鹏.短时受精周期中患者年龄与多原核合子发生及妊娠结局的关系[J]. 中国优生与遗传杂志， 2012， 20（8）： 118-119。

[5] 张丽红.缩短受精前卵母细胞培养和精卵共孵育时间对妊娠结局的影响[J].生殖医学杂志， 2006， 15（2）：127-129.

[6] 李蕾，李尚为，靳松，等.应用卵丘细胞部分剥除法提高行体外受精-胚胎移植后胚胎质量及临床妊娠率的研究[J].中华妇产科杂志， 2006， 41（3）： 201-202.

[7] 谭秀文，谭景和. 胚胎体外共培养：影响因素及作用机理[J].生物工程学报， 2003（19）：502-5051.

（收稿日期：2013-06-14）

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