荧光定量PCR与抗酸染色、结核抗体检测结核分枝杆菌结果对比

对照组（60例）。给予对照组中，采取结核抗体检测，给予研究组中，给予抗酸染色检测，对于观察组中，给予荧光定量PCR检测，对比结核分枝杆菌检测结果。结果 研究组检测阳性率为83.3%，特异性达到100%；较观察组与对照组比较存在差异（P<0.05）。结论 在临床检测结核分枝杆菌中，应用抗酸染色检测，效果要好于荧光定量PCR、结核抗体检测，降敏感性高、特异性强，发挥积极应用价值。

关键词：抗酸染色；结核抗体；荧光定量PCR；结核分枝杆菌

相关医学文献报道，结核病多是由结核分支杆菌感染引起的，强化临床结核杆菌检测，可以有效确诊疾病，并提升临床结核杆菌检测水平[1]。本研究对近年医院收治30例结核病患者以及30例非结核呼吸系统疾病患者，分析荧光定量PCR与抗酸染色、结核抗体检测结核分枝杆菌结果。

1 资料与方法

1.1一般资料 针对在医院2014年1月～2015年1月收治30例结核病患者以及30例非结核呼吸系统疾病患者，患者均知情同意。患者年龄在50～80岁，平均年龄为（66.5±10.3）岁；可以根据检测方法的不同，将其分为研究组（60例）、观察组（60例）、对照组（60例）。

1.2方法 收集30例研究对象的呼吸道病原菌，呼吸道痰标本、上呼吸道咽拭子、支气管镜下抽吸灌洗液。同时，对照组检测中，应用结核抗体检测方法，以清晨的痰取样，直接涂厚片抗酸染色，应用显微镜下观察，做出检测。

观察组检测中，应用荧光定量PCR检测方法，可在患者痰标本中加入1MNaOH溶液混匀，使其液化后，取标本于试剂盒中，进行洗涤沉淀得到扩增的模板，并将其放置在PCR的反应管之中，在其中加入反应液、lUNG、Ll Taq酶、2Ll模板，可以把反应管放置在BIO-RAD iCycler荧光定量PCR检测仪之中，进行结核分枝杆菌检测。

研究组检测中，应用抗酸染色，并可取患者静脉血，分离血清，并结核抗体检测塑料板块中，加入患者血清标本50Ll，然后在清洁无油的玻片上涂开，等到涂片自然干燥之后，可以用片夹挟住玻片一端，以火焰固定，在涂抹面盖上滤纸片，并滴加石炭酸复红染液，确保滤纸片被完全染液浸湿，将试验玻片在小火上加温后，玻片冷，可以滴加3%的盐酸酒精脱色，并滴加30s吕氏美蓝染液，进行水洗，在吸干后进行镜检；其检测结果以阴、阳性表示。

1.3统计处理 针对本次的研究结果，应用统计SSPS20.0版本软件进行结果处理，其中对于计数资料用率来表示，进行χ2检验，且以结果P<0.05表明有统计学意义。

2 结果

经研究组抗酸染色检测，结核抗体检测法特异性达到100%；经χ2检验后，在对照组、观察组中，其检测结核抗体特异性低于研究组抗酸染色检测法，有明显差异（P<0.05）。见表1。

3 讨论

研究指出，临床中应用痰涂片抗酸染色镜检测结核分枝杆菌，其得到的阳性率较高，在抗酸染色之中，针对多种群痰细菌数量检测，可以避免造成假阴性，提升检测阳性率[2]。并且，由于不同人群机体免疫力存在差异，应用抗酸染色检测，可以检测结核分枝杆菌[3]。本次研究中，研究组应用抗酸染色检测法，其特异性高达100%，结核分枝杆菌检测中，较对照组与观察组比较有显著差异（P<0.05）。

荧光定量PCR检测，作为Perkin Elmer公司研制的核酸定量技术，具有高灵敏性、重复性高的特点，其基本的原理，可以在PCR反应体系之中，设计特异性引物，并可在引物的3c端设计双荧光标记探针，构成能量传递。荧光定量PCR检测结核分枝杆菌，其采用密封系统，虽然可以扩增PCR[4]，但是结核分枝杆菌检测中，该方法成本较高。

结核分枝杆菌检测中，由于苯胺染料一般不易使结核分枝杆菌着色，应用抗酸染色方法，在通过加温以及延长染色时间使结核分枝杆菌着色后，应用3%盐酸酒精处理结核分枝杆菌也不易脱色，并且经抗酸染色后，结核分枝杆菌会呈红色，对于非抗酸菌以及细胞杂质就会呈蓝色，易于检测[5]。在结核分枝杆菌检测中，应用抗酸染色，能够有效清除样本干扰，提高检测结果的灵敏度，减少误差，临床检验效果更稳定。

本研究结果充分证实，针对临床结核分枝杆菌检测中，应用抗酸染色技术，敏感性高、特异性强，效果要好于荧光定量PCR、结核抗体检测，值得在实际中推广。

参考文献：

[1]方梅，陆巧荣，洪志强，等.分子信标荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法建立及其临床应用[J].四川大学学报（医学版），2010，41（1）：162-165.

[2]崔金环，杨光，苏锡康，等.荧光定量PCR技术检测石蜡包埋组织结核杆菌DNA的应用评价[J].广东医学，2011，32（20）：2695-2697.

[3]徐菊玲，徐伯赢，周洪昌，等.结核分枝杆菌荧光定量PCR检测方法建立[J].中国公共卫生，2011，27（10）：1250-1552.

[4]杨长绍，王丽，潘鑫艳，等.荧光定量PCR检测石蜡组织中结核分枝杆菌[J].临床与实验病理学杂志，2014，30（3）：321-323.

[5]谭守勇，刘志辉，邓向斌，等.荧光定量PCR检测抗酸染色涂片刮削物中结核分枝杆菌DNA的可行性[J].实用医学杂志，2012，28（12）：2067-2069.编辑/哈涛

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