探究细菌运动活性的影响因素

材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 菌种

白色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、枯草芽胞杆菌和伤寒杆菌。

1.1.2 材料

凹玻片、盖玻片、凡士林、酒精灯、试管、接种环、平皿、结晶紫、墨汁、甲基红等。

1.1.3 仪器

奥林巴斯显微镜、恒温摇床、高压灭菌锅、超净工作台。

1.2 实验方法

将2滴染液滴入到已经培养好的菌液中，作用3分钟后制片。取凹玻片一张，在凹孔四周涂上少许的凡士林，用无菌的接种环挑取一环染色后的菌液置于盖玻片中央，小心翻转带有菌液滴的盖玻片，即可低倍转高倍镜观察。白色葡萄球菌为对照组。

2 结果与分析

2.1 培养条件的影响

分别接种于固体，斜面和液体的培养基中，37度恒温培养箱静止培养和恒温摇床条件下培养。发现细菌的动力实验的最佳条件是37度，180rmp在液体培养条件下培养16个小时，此条件下培养基中的营养物质能够更好的转移和发挥作用，并且好氧菌在通过摇床的培养让更多空气中氧气溶解于发酵液中，利于细菌的生长和动力的观察[2]。

2.2 菌液量的影响

分别用一次性接种环接取菌液。发现用10ul一次性的接菌种环取半环（约5ul）是最佳的菌量，用于下一步实验的观察。菌量的多少对于细菌至关重要，菌量量大的时候，会出现菌体随着液体流动的现象，无法确定是否细菌真的在流动。如果菌液量少的话，标本样本量少，标本容易干，会影响细菌运动。

2.3 制片方法的选择

采用压滴法和悬滴法两种方法能直接观察不同形态下的细菌动力状态。悬滴法下细菌在凹玻片是悬空的，没有压迫更利于运动，而压滴法下载玻片和盖玻片结合的更加紧密，细菌的运动在一定程度下受到影响。

2.4 温度的影响

细菌的运动性对于温度要求比较高，实验之前需将菌液、染色液、载玻片以及盖玻片等材料提前放在37度恒温箱中放置一会。温度过低会影响鞭毛蛋白的活性，细菌的运动会减缓甚至停止，不容易观察到，因此短时间的预热可以避免此种情况的发生。

2.5 化学消毒剂及紫外线的影响

将菌液与0.1%的石碳酸、过氧化氢、新洁尔灭分别作用3分钟，细菌的运动性显著减低或消失。将菌液在紫外线下分别照射15min和30min，发现细菌在15min下活力明显减低，延长时间30min几乎有很少细菌运动的现象。

2.6 细菌运动方式的影响

细菌的运动是指以波浪、直线或者翻转的方式自由定向地从由一个部位移动另一个部位，发生了位移。无鞭毛的细菌不具有真正的运动能力，当受到外界环境液体分子的冲击会发生左右前后、位置不大的颤动，属于布朗运动。因此观察时，注意区分，观察每一个单个菌是否发生了运动。

2.7 显微镜的影响

观察时，注意显微镜的光照的强度。光太强，液体和细菌难以区分。适当的减弱可以影响要适当减弱光强度以增加反差，若光线太强。细菌和周围的液体难以区分。活菌菌体是具有折光性的半透明体，可先用低倍镜找到标本，再以高倍镜观察，否则无法在镜下发现菌体。

2.8 优化的实验结果用的结晶紫、甲基红、墨汁染色后活体观察，效果较理想，结果细菌菌体呈蓝色、淡蓝色或少数无色，细菌波浪式运动清晰可见。以枯草杆菌为例，经过结晶紫染色，可以清楚看到细菌的运动，如图1所示。

3 讨论

细菌运动活性的观察方法常有暗视野显微镜检查法，细菌的运动能够明显的观察到，但形态较差并且仪器昂贵。半固体培养法，采用垂直穿刺进行接种，如果细菌具有鞭毛，

就会沿着穿刺线向四周运动，观察细菌运动的轨迹，但不能直接观察其运动及形态。还有半固体培养时也因试管口径小、需氧菌只宜在浅表琼脂生长，也会影响细菌运动性的观察。玻片法能够较好地观察细菌的形态和运动。但缺陷在于难以调试细菌所在部位的焦点，载玻片和盖玻片占据了一定的厚度，除此之外还要求操作者具有掌握显微镜的熟练技能，以便更好地观察，防止物镜和玻片样本造成破坏。细菌生长条件如氧气、pH及温度等发生变化时，势必会影响细菌鞭毛的活力，导致活性的减弱，甚至丧失。

参考文献

[1]李任峰.细菌鞭毛研究概况及进展[J].微生物学通报，2005，32（06）：124-127.

[2]李凡，徐志凯.医学微生物学[M].8版.北京：人民卫生出版社，2013：18-19.

[3]杜银香.细菌不染色标本动力检查达到较好效果的方法[J].湖北民族学院学报，2010，3：1.

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