食品卫生微生物学检测菌落总数测定方法的探讨

【摘 要】目的：探讨食品卫生微生物检验菌落总数的测定方法。方法：按照国家标准菌落总数测试片法、平板菌落计数法及TTC培养对150份样品进行菌落总数的测定，对三种方法的测定结果进行统计学分析。结果：在本组150分食品细菌总数测定比试验中，国标测试片法、TTC琼脂平板法及计数琼脂平板法测定的结果差异无统计学意义（P>0.05）。结论：测试片法、平板菌落计数法及TTC法检测食品卫生微生物学检验菌落总数结果相似，三种测定方式各有千秋，可依据测定样品的具体实际选择合适的测定方法。

【关键词】食品卫生；微生物学检验；菌落总数

【中图分类号】G642 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）07-4826-01

食品卫生微生物学检验菌落总数测定是检验食品是否合格的重要途径，测试纸片法和平板计数培养基倾注平皿培养计数法是食品卫生微生物学检验菌落总数测定的国标法[1]。在实际工作中，样品中常存在颗粒、沉渣等不易乳化的物质，这些物质较小，在进行菌落计数时常倾注于平皿中，夹杂在琼脂深层与细小菌落类似，不易与细菌菌落区分，对计数结果的准确性产生影响。为探究测定食品卫生微生物学检验菌落总数的最佳方法，对测试片法、平板菌落计数法及TTC法三种检测方法进行分析和比较，现将结果报道如下。

1 对象与方法

1.1对象

平板计数培养基为北京陆桥技术有限责任公司生产，TTC琼脂中TTC的浓度为0.005%，测试片为美国3M公司生产的3M PetrifilmTM细菌总数测试片，样品为某食品企业委托检验的150份食品样品。

1.2方法

平板菌落计数法参照国标GB4789.2-2010检测。用无菌吸管称取25g（液体25ml）样品放置在盛有225ml磷酸盐缓冲液的无菌锥形瓶中，充分摇匀，用1ml的无菌试管吸取1ml的样品均液沿管壁慢慢注入盛有9ml稀释液的无菌试管中，摇晃试管使其充分混匀，稀释成1：100的样品均液，按同样程序制成1：1000、1：10000的样品均液。每个稀释度均液分别吸取1ml注入两个无菌平皿（直径9cm）内。将15ml冷却到46℃计数琼脂培养基倾注平皿，转动平皿使其混匀，待琼脂凝固后将平皿翻转，置 36±1℃的温度下培养48±2h[2]。

3M PetrifilmTM细菌总数测试片的接种需选用2-3个适宜的稀释度，样品稀释均液同平板菌落计数法。将测试片放置在水平台面上，揭开透明薄膜后，用灭菌吸管将样品原液或1ml稀释液均匀加到纸片的中央，将上盖膜轻轻放下，立即用压板使水样均匀覆盖，静置五分钟后使培养基凝固，每个稀释度需接种2片，置 36±1℃的温度下培养48±2h。

TTC法与国标法同步进行，在每100ml琼脂培养基中加入1%TTC溶液1ml。待琼脂凝固后，翻转后置36±1℃的温度下培养48±2h。最后进行各类样品菌落总数的计数。

3 讨论

新国标使用平板计数琼脂替代营养琼脂，并在使用指南中指出：如食品中含有某些受损的生物细胞，则需考虑培养基的实用性。其原因在于营养琼脂培养基含有的抑制损伤细菌生长因素不同，对损伤细菌的成长影响较大{3}。新国标采用的平板计数培养基，对培养基的成分进行改变，在一定程度上利于受损细菌的恢复，以利于计数。本研究结果表明，TTC平板法的检出率高于两种国标方法。原因在于，一些菌落细小，或生长与琼脂内部，因颜色与琼脂接近，肉眼无法观察到。TTC原理是依据绝大多数细菌具有脱氢酶，可使相应的作用物达到脱氢的作用，然后用TTC作为受氢体，使其成为非溶解性产物一三苯甲，是细菌着色，以便于计数。本研究中，对150份样品的检测结果差异不显著，提示TTC法可使菌落着红色，但食品残渣微粒仍保持原来的颜色，易于鉴别菌落，且不影响细菌本身的生长。另外，测试片方法仍可取的满意的检验效果，与其他两种方法的检测结果无差异，该结果对于食品企业的意义重大。因为此方法简单易行，可操作性强，减少了配置培养基等繁琐缓解，非专业人员在经过简单培训后即可操作，便于食品企业的抽样检验[4-5]。

综上所述，平板菌落计数法、3M PetrifilmTM细菌总数测试片、TTC琼脂平板法测定食品卫生微生物学检验菌落总数的结果相似，三种方法各有千秋，可根据自身需要选择合适的检测方法。

参考文献

[1] 张卫军，王洪艳.食品中菌落总数检测结果不确定度的评定[J].现代预防医学，2013，40（03）：533-535.

[2] 郭昌华，李红梅，贺漓漓，等.食源性致病菌质控样品检测结果分析[J].中外健康文摘，2012（30）：26-27.

[3] 杨红，凌秀梅，李俊霞，等.TEMPO/TVC法与国标方法测定食品中菌落总数的比较研究[J].微生物学通报，2012，39（09）：1349-1353.

[4] 刘弋青，吕维敏，刘魁武 ，等.基于滤膜上细菌直接计数法的细菌总数快速检测[J].生物医学工程研究，2009，28（01）：60-62.

[5] 徐进，庞璐.食品安全微生物学指示菌国内外标准应用的比较分析[J].中国食品卫生杂志，2011（05）：472-477.

推荐访问： 菌落 微生物学 食品卫生 总数 探讨

---