弱精子症患者精子中SEPT7基因表达情况研究

Ⱬ,�Ț��p��m�籦���*'������触���ljwm�׭z����!z�^�+l���jX�籦���*'��/�׬j�"z{b~'jȬ~���bj �+��ky�fz{���� +vĄ=>�zw�ƚ޲Ȩ�-��貗��&���ޕ�b�����mu�F���"http://www.film1981.com/doc/jihua/" target="_blank" class="keylink">计划生育委员会的调查数据显示，我国男性精液质量逐年下降，在工业发达的地区，精液中精子质量下降的速度更快，弱精子症成为男性不育的主要原因中的一种[2]。针对男性不育弱精子症情况，本研究收集我们门诊就诊的弱精子症患者40例的精液标本，对精子中的人隔蛋白7（SEPT7）基因表达进行研究，以期为患者的临床诊断和治疗提供新的思路和方法。

1资料与方法

1.1一般资料

本研究获得医院伦理委员会许可，留取2013年4月至2014年12月我院门诊就诊的弱精子症40例患者的精液标本作为研究组，留取患者均对本次研究知情，并同意参与研究，患者年龄在24～36岁之间，平均年龄在（29.4±1.2岁）。留取患者夫妇同居时间在1年以上，未采用任何避孕措施，是男方原因造成的女方不孕。患者精液参数中的精液量和形态学正常，精子活力（a+b）级<50%。排除支原体和衣原体等感染性的标本；排除精浆抗精子抗阳性等自身免疫性标本，排除精浆果糖、生殖激素等生化检查结果异常的标本。

1.2精子活力判断

精子活动能力分为4级：a级：精子活动力极好，呈快速直线向前运动；b级：精子活动力很好，直线向前运动；c级：精子活动力一般，向前曲线运动；d级：精子活动能力差，只在原地蠕动。弱精子症是指（a级和b级）小于50%或a级运动的精子小于25%。

1.3方法

将40例患者的精液在取精，准备标本操作结束后，分出上层云雾状正常活力精子标本及底部沉淀弱精子标本。然后分别采用逆转录-多聚酶链式反应（RT-PCR）及STEP7蛋白检测（免疫细胞化学分析）进行研究。

1.4统计学处理

采用SPSS17.0软件包进行统计学分析。SEPT7 mRNA和蛋白在两组中表达量变化的数据采用t验进行分析；检验水准α=0.05。

2结果

2.1患者精液参数比较

患者的正常精子的浓度及pH与弱精子无关，不具有统计学意义（P>0.05）；在前向运动精子率上，弱精子明显不如正常精子，差异显著，具有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2患者不同精子SEPT7基因表达

患者的正常精子与弱精子在SEPT7 mRNA基因表达上具有显著差异，在蛋白检测中同样具有显著差异，具有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3患者精子中的SEPT7的定位与表达

患者正常精子的平均光密度值高于弱精子，与弱精子比较差异显著，具有统计学意义（P<0.05）。见表3。

3讨论

3.1导致弱精症的因素

弱精症与精子活力程度有一定的关系，随着社会的发展，男性群体存在生殖道感染、抗精子抗体、精索静脉曲张、隐睾症、生育相关的各种激素水平失调、精液不液化、精液黏稠度过高、糖尿病等全身性疾病，这些疾病对男性的精子活力造成了影响[3，4]。而吸烟、饮酒、服用药物等因素也对精子造成了影响，从而导致了男性精子过弱和不育症的发生[5]。但在临床上，对男性精子活力降低的因素由于类多而杂，因此，不能明确找出原因，同时，由于发病机制不清晰，弱精子症患者的精液标本NO增高，超氧化物歧化酶降低，精子膜的流动性减低，蛋白质磷酸化受损，精浆内微量元素的缺乏都与精子的活力有着密切的关系[6-8]。

3.2精子运动与弱精症

精子是靠精子鞭毛的摆动实现运动的，这个过程实质是轴丝及其附属结构在调节蛋白的协调下，促进鞭毛重复循环的拍击、波动，从而使精子能够向前运动，借助运动力穿过宫颈黏液的位置，顺利到达受精的位置，然后再穿过放射冠部位、透明带位置，再进入到朊细胞的包浆内，与卵子结合成受精卵[9]。在目前的研究中发现，精子在运动过程中，参与运动的精子鞭毛轴丝及其附属结构的蛋白达到了250多种，其中的动力蛋白、辐射轴蛋白具有调节的作用，微管素蛋白和连接蛋白构成了轴丝，ODFS和FS等附属结构维持了鞭毛轴丝的结构的完整性[10，11]。当精子上的这些组成成分发生突变时，精子鞭毛的结构和功能发生紊乱，导致弱精子症的发生。

3.3Septins在精子中的地位

Septins最开始是构成酵母芽颈的主要结构，是在酵母中发现的，不论哪一种表达发生缺失，都会使酵母细胞的周期发生问题，如停滞、出牙生长缺点等，分析原因，这是与母细胞、芽细胞之间的分离有直接的关系，因此被称为Septins[12]。随着医学技术的进步，人们对分子研究水平的提高，发现一些基因和蛋白与弱精子症有着一定的关系。通过导致弱精子症发病机制的认识，发现tektin-t、DNAI1，DNAH5和DNAH11、AKAP3和AKAP4、Smcp等都与弱精子症有关，其中Septins是得到关注较多的一组基因[13]。Septins是具有GTP酶活性的高度保守的细胞骨架蛋白家族，目前已知的家族成员有14个，在经过不同的剪接、翻译位点的方式，产生了多种变异剪接的亚型，其中在精子中段和主段之间的环形结构上，SEPT7定位成为中段和主段分界的主要标志[14]。经过减数分裂，精子细胞分化、成熟，在运动中具有重要的地位。SEPT7作为精子鞭毛结构组成成分中的一种，在精子发生过程中，能够维持线粒体结构，促使环结构形成。以雄性小鼠为例，当将SEPT7基因除掉后，精子环结构出现了缺失情况，进而失去了活动能力，不能泳动，由于精子的运动能力是在附睾上获得的，当小鼠的线粒体发生紊乱、异形、嵴数量减少，这种出现紊乱的环结构或Septin环在弱精子症的表现中是一个亚型[15]。在小鼠精子形成的各个阶段SEPT7表达的研究中发现，从精母细胞至成熟精子之间的各个阶段表达中，SEPT7的表达均很明显，从减数分裂后，形成精子的第9步开始，圆形的精子细胞质随着线粒体在精子颈带核周环的位置聚集，而在10～11步后，SEPT7和线粒体的信号开始向精子尾部移动，而且在成熟的精子的头部和尾部的环结构定位，其中尾部的浓度最高[16]。同时发现的是，弱精子症患者的SEPT7信号较弱，这证实SEPT7在精子鞭毛中段和环结构的构成中存在，并扮演着重要角色。此外，研究发现弱精子症患者的精子环结构SEPT4和SEPT7亚型的缺陷，由此推测SEPT7在精子中段和环形成中，与DNAJB13产生直接或间接的作用。考虑到环结构的异常定位可能导致线粒体鞘的缺失，可以推测SEPT7可能参与精子亚细胞间隔的形成，使鞭毛各段成为独立的区室。因此SEPT7可作为检测精子成熟的生物标记[18]。

综上所述，导致弱精子症的原因具有复杂性，发生机制不明，因此，在临床治疗上缺乏针对性，导致治疗效果很难预测，一些患者只好将希望投注在辅助生殖技术上，但存在昂贵的费用和相应的遗传风险。本研究对SEPT7基因表达进行深入研究，期望能够作为诊断弱精子症患者基因诊断的新方向，并给予准确的治疗。而人精液中SEPT7试剂盒在研究成功后的应用，使正常男性精液SEPT7基因与蛋白表达水平有了的参考范围，对弱精子症患者的SEPT7基因表达的检测、治疗提供了新的思路，具有可靠的前景。

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