BAIAP2基因多态与儿童注意缺陷多动障碍共患学习困难的关联分析

计划(Hapmap)数据库(www.hapmap.org)提供的汉族人群遗传学数据，根据连锁不平衡和标签SNPs的筛选原则，在BA，IAP2基因内部选择9个SNP(表1)。

1.3.3基因型检测

采用Applied Biosystems公司生产的7900HT型荧光定量PCR仪完成等位基因分型，使用标准SNP基因分型分析试剂(货号：4351379)进行反应。应用随机软件Sequence Detection System

2.3连锁不平衡及单体型遗传关联分析

V.2.3(SDS2.3)进行PCR扩增(standard curve)及反应终点基因型判读。PCR反应在384孔板(包含5ngDNA的5μL体系)中进行。PCR循环参数：95℃10min，92℃15s，60℃1min，共40个循环。

1.4统计分析

采用Haploview4，2软件(htqp：//www.broad.mit.edu/mp/haploview/)进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验、连锁不平衡(1inkage disequilibrium，LD)、单位点和单体型(haplotype)的遗传关联分析，分别比较病例组与对照组之间各SNPs的基因型和等位基因及单体型的频率差异。对上述分析结果采用基于5000次样本对换的置换检验(permu—tation test)以消除多重假设检验可能产生的假阳性误差。统计学显著水平设为双侧α<0.05。

2　结果

2.1 Hardy-Weinberg遗传平衡检验

9个SNPs位点的基因型频率经Hardy-Wein—berg遗传平衡检验，各SNPs位点的基因型在病例组和对照组的观察值和预期值之间差异均无显著性(P>0.05，表1)。

2.2单个SNP位点的关联分析

在全部ADHD共患LD的病例及进一步分性别分析后单个SNP位点的关联分析(表2)，经置换检验后，仅SNP9位点的T等位基因与男性ADHD共患LD(校正后P=0.066)和SNP1位点的G等位基因与女性ADHD共患LD(校正后P=0.089)仍存在关联的趋势。为了解各遗传标记位点的连锁不平衡(LD)情况，对各SNPs位点进行了相邻位点间的LD分析(图1)。可组成3个单体型块(haplotypeblock)。

2.3.1各单体型与ADHD共患LD的关联分析

经置换检验后，Blockl的AAGG单体型与ADHD共患LD仍存在显著性关联(校正后P=0.003)，Blockl的ACAA单体型与ADHD共患LD仍有显著性趋势(校正后P=0.085)(表3)。

2.3.2各单体型与男性ADHD共患LD的关联分析

经置换检验后，Blockl的AAGG单体型仍与男性ADHD共患LD有显著性关联(校正后P=0.010)，Block3的CT单体型与男性ADHD共患LD仍有关联趋势(校正后P=0.086)(表4)。

2.3.3各单体型与女性ADHD共患LD的关联分析

Blockl的ACAA单体型与女性ADHD共患LD的关联有统计学意义(P=0.045)，经置换检验后，关联无统计学意义。

3　讨论

本研究选取BAIAP2基因的9个SNP位点，在ADHD共患LD的病例对照研究中发现，经置换检验后，Blockl的AAGG单体型分别与ADHD共患LD(P<0.05)和男性ADHD共患LD存在显著关联(P<0.05)。提示BMAP2基因多态性在中国汉族人群中可能与ADHD共患LD的病理机制有关，且这种作用机制可能存在性别差异。

本研究发现，与男性共患LD的儿童ADHD关联的SNP位点及单体型和与女性共患LD者关联的SNP位点不同；置换检验后只有单体型AAGG与男性ADHD尚存在关联。提示该基因多态性与ADHD共患LD的关联存在性别差异，主要是与男性共患LD的儿童ADHD关联。考虑到ADHD患病率，酶的效应、遗传异质性及基因转录和表达都存在显著的性别差异，且不同性别间ADHD患者神经认知特点也存在差异，这些差异可能解释男女样本的不同关联结果。

Ribases等在西班牙样本中的结果显示，单标记和多标记分析均发现BMAP2基因与成人ADHD关联(P<0.01)，成人ADHD一般伴有更为持续和严重的认知功能障碍。在德国样本中验证了BAIAP2基因与成人ADHD的关联结果(P<0.01)。Toma等发现BAIAP2基因的rs11657991位点与孤独症存在关联，提示该基因可能参与了不同精神障碍共同的病理机制。不表达BAIAP2的转基因小鼠表现出空间学习和新目标识别功能的损害，提示IRSp53与NMDA受体介导的兴奋性突触传递、长时程增强及学习和记忆行为的调节有关。与BAIAP2基因关系较密切的BAIs基因与突触发生有关，研究发现编码BAl3基因区域的SNP位点与精神分裂症存在关联。上述研究提示BAIAP2基因可能参与了与学习和认知功能有关的生物学过程。

本组之前的研究发现共患LD与不共患LD的ADHD在5-HTID、5-HT2C、色氨酸羟化酶和5-HT转运子基因多态上存在遗传差别。国外研究较多的是阅读障碍(Reading disability，RD)，RD是LD的一种常见表现形式。研究发现6p22的染色体区域与RD和ADHD的症状表现均存在关联，提示ADHD和RD可能存在共同的病理机制。Comish等首次报道DAT1基因多态与RD存在关联，而DAT1基因与ADHD病理机制有关，提示RD可能是ADHD一个较好的内表型标记。可见相对ADHD这种异质性较强的复杂疾病，共患LD的ADHD是一个较为精细的表型，可能存在不同的遗传学基础。

综上，本研究为首次探讨BAIAP2基因与ADHD共患LD的关联分析。上述研究结果提示该基因可能通过参与学习和记忆等认知行为有关的过程，参与了ADHD共患LD的病理机制。

4　未来研究方向

本研究采用病例对照关联研究发现中国汉族人群脑特异性血管发生抑制剂1相关蛋白2(BAIAP2)基因多态性与共患学习困难的儿童注意缺陷多动障碍关联；未来计划在更大的样本中，探讨该基因与ADHD不同亚型及其他认知内表型(如智商、执行功能、空间注意等)的关联研究，深入探索该基因在ADHD发病过程中的作用。

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