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四川省猕猴桃贮藏期炭疽病生物学特性及防治研究

时间：2022-03-29 10:18:17  浏览次数：次

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作者简介 胡容平（1979—），男，四川营山人，副研究员，硕士，从事植物病害研究。*通信作者，助理研究员，硕士，从事植物病害研究。

收稿日期 2018-11-09

果实腐烂是一个全球性问题，在世界范围内新鲜水果贮藏过程中有25%～30%因腐烂变质而不能利用，严重时达50%[1]。由于猕猴桃果实为呼吸跃变型[2]，采后贮藏过程十分容易腐烂[3]，其中炭疽病是贮藏期危害最严重的病害之一，初期会出现褐色病斑，最后病斑连接成片整个腐烂[4]，炭疽病还会使果实硬度、VC含量等迅速下降[5]，对猕猴桃树体发育和果实内外在品质造成严重影响，阻碍了猕猴桃产业的健康发展。目前国内外对猕猴桃炭疽病的研究较少，主要集中在病原鉴定、发生规律及药剂防治上[4，6-7]。笔者针对猕猴桃贮藏运输中的炭疽病危害情况，以期确定四川省猕猴桃主要产区果实采后炭疽病致病的主要原因及条件并研究其生物学特性，筛选防控炭疽病菌的高效低毒试剂，减少果实储藏病害，以此延长其保鲜时间、降低其贮藏期猕猴桃炭疽病的发病率，提高经济效益，旨在为病害的防控提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

病原菌：于2014—2016年从四川猕猴桃主产区都江堰、双流、邛崃、蒲江、雅安、苍溪及彭州等地收集腐烂的猕猴桃果实，分离鉴定出的尖孢炭疽菌（Colletorichum acutatum）。

PDA培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、蒸馏水1 L。

药剂：50%多菌灵[8-9]、65%代森锌[10-11]、50%乙烯菌核利[12-13]、70%甲基托布津可湿性粉剂[14-15]。

1.2 猕猴桃采后炭疽病病原菌生物学特性研究

1.2.1 温度对菌丝生长的影响。将活化后的菌株用5 mm打孔器取菌落最外圈生长一致的部分打制菌饼，接种在PDA平板中央，分别置于5、10、15、20、25、30、35和40 ℃的培养箱中，每天测量菌落直径并计算生长速度，共测定7 d。各处理重复3次，该试验重复2次[16]。

1.2.2 光照对菌丝生长的影响。设置全光照、12 h光暗交替和全黑暗培养3种处理，光源为普通荧光灯（60 W）。

1.2.3 湿度对菌丝生长的影响。选择20%RH、30%RH 、40%RH 、50%RH 、60%RH 、70%RH 、80%RH、90%RH对菌丝生长进行处理。

1.2.4 pH对菌丝生长的影响。设置pH为4～10，以1为梯度，共7个处理。

1.2.5 碳源对菌丝生长的影响。以查氏培养基为基础[17]，测定葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉、乳糖6种碳源对菌丝生长的影响，以不加蔗糖的查氏培养基为对照。

1.2.6 氮源对菌丝生长和孢子萌发的影响。以查氏培养基为基础培养基，测定牛肉膏、蛋白胨、硝酸钾、尿素、硝酸铵、硫酸铵6种氮源对菌丝生长的影响，以不加硝酸钠的查氏培养基为对照。

1.3 高效低毒药剂防治试验

1.3.1 不同药剂对病原菌菌丝生长的影响。用菌丝生长速率法测定，将分离纯化所得菌株在PDA平板上25 ℃培养3 d后，用打孔器在菌落边缘制成直径5 mm的菌饼，接入含系列浓度药剂的PDA平板上，其中50%多菌灵、65%代森锌、50%乙烯菌核利、70%甲基托布津可湿性粉剂浓度均选择500倍液、800倍液、1 000倍液。

1.3.2 不同药剂对病原菌毒力测定。采用药皿法[18]。将药剂与PDA培养基混匀，配成所需浓度的药液培养基混合物，以不含药的PDA培养基作为对照。接种直径5 mm的菌片，每个处理重复3次，置于25 ℃培养箱中暗培养，3～7 d后用十字交叉法测量菌落直径。

通过测定4种杀菌剂对病原菌菌丝生长的抑制作用，计算抑制率，将不同浓度下的抑菌率转换成概率值，将其作为依变量（Y），每个浓度值的对数值作为自变量（X），利用最小二乘法建立回归方程式：Y=A+BX。再利用此方程式求得几率值为5.0时的浓度，即EC50[19-20]。

2 结果与分析

2.1 猕猴桃采后炭疽病病原菌生物学特性

2.1.1 温度对菌丝生长的影响。四川多地采后果实感染的炭疽病，经分离、鉴定由尖孢炭疽菌（Colletorichum acutatum）引起。

由图1可知，猕猴桃炭疽菌在5 ℃和40 ℃下不能生长，在10～35 ℃时均能生长，最适温度为25 ℃，低于10 ℃和高于35 ℃均不适宜病原菌菌丝生长。10～25 ℃時，随着温度的升高，菌丝生长速度加快;但温度超过25 ℃，菌丝生长速度逐渐下降。

2.1.2 光照对菌丝生长的影响。由图2可知，在不同光照条件下，病原菌菌丝生长速率无显著差异，这说明炭疽病病原菌对光照不敏感。

2.1.3 湿度对菌丝生长的影响。

由图3可知，猕猴桃炭疽菌在20%RH和90%RH下不能生长，在30%～80%RH时均能生长，最适湿度为30%RH和70%RH，低于30%RH和高于80%RH均不适宜病原菌菌丝生长。

2.1.4 pH对菌丝生长的影响。

由图4可知，猕猴桃炭疽病菌在pH 4～10时均能生长，pH为6时菌丝生长最快;pH为4时菌丝生长最慢。pH 7～10时菌丝生长速度差异不显著，说明该菌适合在中性及偏碱性环境下生长。

2.1.5 碳源对菌丝生长的影响。

由图5可知，炭疽病病原菌在供试6种碳源上均能生长，但在不同碳源上菌丝生长速度存在显著差异。猕猴桃炭疽菌在麦芽糖培养基上菌丝生长最快，边缘整齐;在乳糖培养基上生长最慢，且边缘不规则。

2.1.6 氮源对菌丝生长的影响。

从图6可以看出，猕猴桃炭疽病菌在蛋白胨、牛肉膏上菌丝生长最快，与其他类型的氮源差异显著;在硝酸铵和硫酸铵上生长最慢、菌落畸形。

2.1.7 炭疽病病原菌接种结果。

将炭疽病病原菌接种到健康猕猴桃，结果表明，炭疽病菌在有伤和无伤情况下均感染健康猕猴桃，但发病较慢，在25 ℃保湿培养下4 d左右才开始出现病症。由此可以推测，猕猴桃炭疽病菌不但可以通过伤口入侵，还可以通过皮孔入侵寄主。由此可以看出，猕猴桃炭疽病易在果实中传播，不利于果实贮藏。

2.2 高效低毒药剂防治结果

2.2.1 不同药剂对炭疽病菌菌丝生长的抑制作用。

通过测定4种高效低毒杀菌剂对猕猴桃炭疽病菌菌丝生长的抑制作用，对结果进行回归分析，各种药剂的回归方程式、EC50、相关系数R2 见表1。4种杀菌剂对病原菌菌丝生长的致死中浓度差异显著，65%代森锌的抑制作用最强，EC50为2.9 μg/mL，50%乙烯菌核利的抑菌作用次之，50%多菌灵、70%甲基托布津可湿性粉剂对炭疽病菌菌丝生长抑制效果最差，且差异不显著，分别为3 699和3 780  μg/mL。

2.2.2 不同药剂对炭疽病菌孢子萌发的影响。

从表2可以看出，抑制炭疽病菌分生孢子效果最好的是65%代森锌1 000倍液，略高于65%代森锌800倍和500倍液，从绿色防控角度而言，65%代森锌1 000倍液具有较强的高效低毒性能，值得进一步研究。

3 结论与讨论

3.1 猕猴桃炭疽病病原菌的生物学特性

通过研究猕猴桃炭疽病病原菌（Colletorichum acutatum）的生物学特性，结果表明其最适温度为25 ℃，对光照条件不敏感，最适湿度为30%RH和70%RH，最适pH为6，最适碳源和氮源分别是麦芽糖和蛋白胨，主要通过伤口侵入寄主体内。王瑞玲[21]研究表明猕猴桃炭疽病原菌在0 ℃和40 ℃不能生长，更适合在中性和偏碱性下生长。赵丰[22]研究表明猕猴桃炭疽病菌通过刺伤口更容易侵染果实。该试验病原菌生物学特性研究能够为四川猕猴桃主产区采后的贮藏条件提供依据，减少炭疽病的侵染。由于气候、地理环境不同，各地炭疽病病原菌生理生化作用会有所不同，从而影响其生长条件，因此需要因地制宜地确定猕猴桃炭疽病病原菌的生长条件，

避免猕猴桃在贮藏期发生严重病害。

3.2 4种高效低毒药剂的防治效果

通过对50%多菌灵、50%乙烯菌核利、65%代森锌、70%甲基托布津可湿性粉剂4种药剂的3种不同浓度进行炭疽病原菌防治试验，结果表明，65%代森锌对菌丝生长抑制作用最强，EC50为2.9 μg/mL，其1 000倍液对炭疽病菌孢子的抑制效果最好。该药剂为高效低毒杀菌剂，可以作为四川猕猴桃主产区室外田间试验的首选药剂，但并不代表能够在田间起到很好的防治效果，该研究由于条件限制，针对四川猕猴桃产区的发病情况对4种药剂进行了筛选，有一定局限性，需要进一步扩大药剂筛选范围，增加施药方式，为猕猴桃贮藏期炭疽病的防治提供更合理的药剂和更科学的方法。由于各地区病菌的生理生化作用、抗药性以及对药剂的敏感程度有所不同，在病害防控中需要根据当地情况，有针对性地进行防控，相关的田间防治还需要进一步研究。

参考文献

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