耐力训练减轻高脂饮食相关非酒精脂肪肝大鼠肝脏炎症的内质网机制研究

材料和方法

1.1 实验试剂

抗核转录因子激活蛋白-1（AP1），核转录因子kappa B（NF-κB），X盒结合蛋白（XBP）1，c-Jun氨基末端激酶（JNK）;磷酸化JNK;核因子κ-B激酶抑制剂（IKK）及磷酸化IKK购自于Santa Cruz Biotechnology（Santa Cruz，CA，USA）;抗真核起始因子（eIF）2α，磷酸化p-IF2α，葡萄糖调节蛋白（GRP）78，C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白（CHOP）;甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH），羊抗兔和羊抗小鼠IgG（辣根过氧化物酶标记）二抗由Cell Signaling Technology（Danvers，MA，USA）提供。ELISA试剂盒（卡尔文生物，苏州）;PVDF膜，ECL发光液体（Millipore，MA，USA）;BCA蛋白定量试剂盒，显影及定影液（Beyotime，北京）。其余常用实验药品或试剂均由当地零售供应商。

1.2 实验动物及NAFLD模型建立

Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠80只购自于复旦大学实验动物中心，许可证号：SYXK沪2014-0029。8周龄，体重185 ～ 210 g;饲养环境：温度：22℃～26℃;湿度：60%，分笼饲养（笼/8只）;昼夜光变化周期：12 h光照，12 h黑暗;适应喂养期动物自由饮食。之后随机调整动物饲养方案，动物数量比为1 ∶ 1。具体饲养组分方案[10]参照见表1。

1.3 动物分组及运动干预

正常饮食方案大鼠分为对照组（CON）和正常饮食运动干预组（CON + AET）;高脂饮食方案动物分为高脂模型组（HFD）和高脂饮食运动干预组（HFD + AET）。每组20只。CON + AET和HFD + AET组进行8周跑台训练。耐力训练方案参照我们之前的研究方法[11]。简要如下：大鼠先进行为期1周的适应性训练（15 m/min;6 d/w）进行动物运动能力评估，剔除不善运动的动物，之后进行正式实验。运动方案为：每周训练为6 d，跑台训练时间为1 h，速度为20～25 m/min;训练时间在每天08：00～10：00，坡度为5°。终末做力竭运动进行大鼠运动能力测试。

1.4 动物处死及取材

8周干预结束后，实验动物禁食过夜，次日上午8：00麻醉（2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉）颈椎脱臼法处死，采集肝脏组织并置于液氮冻藏待测。模型构建评价由专科医生通过组织病理学切片进行盲法判定。

推荐访问： 内质网 炎症 肝脏 耐力 酒精

---