三丁酸甘油酯对草鱼幼鱼体成分与形体指标及肠道消化酶的影响

材料与方法

1.1    试验饲料的制作

参照草鱼幼鱼的营养参数和商品饲料配方，以鱼粉、豆粕、棉粕和菜粕为蛋白源，豆油为脂肪源，面粉为糖源，配制4组等氮等脂的饲料。分别为基础日粮组（T1）以及在基础日粮组中分别添加300 mg/kg（T2）、600 mg/kg（T3）和1 000 mg/kg（T4）三丁酸甘油酯（由青岛柯能生物科技有限公司提供）的4个试验组，每个处理组设置3个重复。在饲料制备之前，鱼粉和豆粕等饲料原料先粉碎，过40目筛网，再按配比从小到大逐级定量均匀混合;再将其放入V型搅拌机中充分混合25 min。随后将豆油与已混好的干粉充分混合，再加入适量的水揉匀，将其加工制成直径2.0 mm的颗粒饲料，晾干至饲料水分为10%左右，置于-20 ℃冰箱中保存备用。饲料配方表及营养成分见表1。

1.2    试验动物的饲养与管理

选用同规格、同批次的健康草鱼鱼苗，在娄底水库中进行网箱养殖。正式养殖试验之前，驯食1周以适应环境和饲料（5 m×5 m×5 m）。饥饿24 h后，挑选规格一致、体质健壮的草鱼幼鱼随机分到各个网箱（2 m×2 m×2 m），每个网箱投放40尾草鱼，草鱼初始体重（20.04±0.19）g。每天投喂3次，投喂时间为7：00、12：00和17：00，日投饵量为体质量的3%～5%，养殖周期为8周。养殖试验期间，水温为27.0～31.0 ℃。

1.3    样品采集

试验第8周结束时，禁食24 h，每网箱随机选取5尾草鱼测量体长、体重后，冰盘迅速解剖并分离内脏团、肝胰脏，肠道并称取重量，测量肠道长度，计算形体指标。同时用冷冻的去离子水冲去剔除的肠周围脂肪和内容物，取肠道放入1.5 mL离心管中，编号并标记，放入-80 ℃冰箱保存备测肠道消化酶活力。取5尾草鱼置于-20 ℃冰箱冰冻作全鱼样品，用于体成分的测定。

1.4    指标测定

1.4.1    鱼体营养成分。鱼体常规成分测定参照文献[11]。其中水分的测定采用105 ℃烘箱干燥恒重法测定，粗蛋白的测定采用凯氏定氮法，粗脂肪的测定采取索氏抽提法，粗灰分采用550 ℃灼烧法测定。

1.4.2    形体指标。肥满度（CF）（g/cm3）=100×终末鱼重（g/尾）×體长（cm/尾）-3;脏体指数（VSI）（%）=100×内脏重量（g/尾）/终末鱼重（g/尾）;肝体指数（HSI）（%）=100×肝胰脏重量（g/尾）/终末鱼重（g/尾）;肠体指数（ISI）（%）=100×肠道重量（g/尾）/终末鱼重（g/尾）;肠长指数（RGL）（%）=100×肠道长度（cm/尾）/终末鱼重（g/尾）。

1.4.3    肠道消化酶。肠道消化酶在测定前需将肠道样品解冻，淀粉酶和脂肪酶用生理盐水进行匀浆，胰蛋白酶用匀浆介质进行匀浆，放入离心机3 500 r/min下离心10 min，取上清液保存待测，然后用南京建成生物有工程研究所试剂盒进行测定，测定仪器为酶标仪（Thermo-1510）和分光光度计（UV-5200）。

1.5    数据处理与分析

通过SPSS 19.0和Excel 2016对数据进行单因素方差分析和数据处理，若数据差异显著（P<0.05），则Duncan分析进行多重检验，数据用平均值±标准误（Mean±SE）表示。

2    结果与分析

2.1    鱼体营养成分

由表2可知，与对照组T1相比，T4组的水分含量显著下降（P<0.05），粗蛋白含量有提高的趋势，T2、T3组的鱼体水分和粗蛋白含量无显著差异（P>0.05）。各组之间的粗脂肪和粗灰分含量无显著差异（P>0.05）。

2.2    形体指标

由表3可知，与对照组T1相比，T2、T3和T4组的肝体指数显著提高（P<0.05），T2组的肠体指数显著提高（P<0.05）。T3和T4组的肥满度、脏体指数、肠体指数和肠长指数较对照组均有上升的趋势（P>0.05）。

2.3    肠道消化酶活性

由图1、2、3可知，与对照组T1相比，T3组草鱼肠道脂肪酶活力显著提高（P<0.05），淀粉酶和胰蛋白酶活力呈下降趋势（P>0.05）。T1、T2和T4组间的脂肪酶活力无显著变化（P>0.05）。T2组的淀粉酶活力较T1组有提高的趋势（P>0.05），T4组显著提高（P<0.05）。T2和T4组的胰蛋白酶活力与对照组T1比有提高的趋势（P>0.05）。

3    结论与讨论

该试验结果表明，饲料中添加三丁酸甘油酯能够改变草鱼幼鱼的鱼体成分、提高肝体指数、肠体指数等形体指标，增加肠道消化酶活力。

魚类的营养价值主要在于鱼肉中含有丰富的完全蛋白质。通常来说，鱼体营养成分是比较稳定的。本研究结果表明，与对照组相比，不同添加量的三丁酸甘油酯对草鱼幼鱼的鱼体粗脂肪和粗灰分含量无显著影响，这与研究丁酸钠对草鱼[12]体成分的作用研究结果类似。但是添加1 000 mg/kg三丁酸甘油酯显著降低了草鱼鱼体的水分含量，粗蛋白含量有提高的趋势。这说明三丁酸甘油酯能促进蛋白质的合成，原因可能与丁酸能调节机体内分泌水平有关[13]，具体原因需要进一步深入的研究。陈秀梅等[14]在建鲤（Cyprinus carp-iovar Jian）上的研究也发现γ-氨基丁酸（4-Aminobutyric acid）的添加提高了鱼体肌肉中的蛋白质含量。

鱼体肥满度是检验鱼体肥瘦的重要指标，脏体比、肝体比、肠体比和肠长比是判断内脏、肝脏及肠道发育程度的关键标志。本试验结果显示，添加600、1 000 mg/kg三丁酸甘油酯的处理组较对照组而言，草鱼的肥满度和脏体比均有提高的趋势。乔丽红等[15]研究表明，三丁酸甘油酯有提高建鲤脏体比的趋势;而孙浪等[16]发现2.5 g/kg丁酸钠可以显著提高鲫鱼（Carassius auratus）的肥满度。上述研究结果与本结果类似。同时，与对照组相比，添加不同水平的三丁酸甘油酯显著提高了草鱼幼鱼的肝体比。这可能是因为丁酸能促进乙酰COA合成脂肪，或通过羟甲基戊二酸单酰COA途径促进胴体合成，从而促进了脂肪的吸收利用[17]。研究表明，肠体比和肠长比是衡量动物肠道消化吸收功能的指标之一[18]。本研究中，与对照组相比，饲料中添加600、1 000 mg/kg三丁酸甘油酯后，草鱼的肠体比和肠长比也有增加的趋势。原因可能是丁酸通过调节mRNA和蛋白质的合成，或者刺激结肠内水和钠离子的吸收，提高黏膜修复酶的活性，从而促进肠道上皮细胞增殖，提高肠绒毛长度和隐窝深度，并增加其质量和长度[19-20]。相似结论在田莉[21]研究丁酸钠对草鱼肠道健康影响的试验中也有体现。

肠道消化酶（脂肪酶、淀粉酶和胰蛋白酶等）活力的增加能够提高动物肠道对营养物质的消化吸收能力，进而促进机体的生长[22-23]。本试验中，与对照组相比，添加600 mg/kg三丁酸甘油酯能显著提高草鱼的肠道脂肪酶活力，添加300、1 000 mg/kg三丁酸甘油酯组的淀粉酶和胰蛋白酶活力也有不同程度的上升。在猪[24-25]、肉鸡[26]、草鱼[21]的研究也发现，三丁酸甘油酯能够提高动物肠道脂肪酶、淀粉酶和胰蛋白酶活力，与本研究结果类似。通常来说，丁酸具有降低饲粮pH值、增加肠道酸度、激活蛋白酶原和提高消化酶的作用[27-28]。同时，丁酸可以诱导胰岛素和胰高血糖素的产生，起到调节肠道消化酶的效果[29-30]。但是600 mg/kg三丁酸甘油酯组的草鱼幼鱼肠道淀粉酶和胰蛋白酶活力较对照组而言有一定的下降趋势，这与以往的研究结论稍有不同，具体原因需要进一步的研究。从整体上讲，草鱼幼鱼饲粮中添加三丁酸甘油酯能够提高机体肠道消化酶活力。

4    参考文献

[1] CABELLO F C.Heavy use of prophylactic antibiotics in aquaculture：a growing problem for human and animal health and for the environment[J].Environmental Microbiology，2006，8（7）：1137-1144.

[2] DEFOIRDT T，SORGELOOS P，BOSSIER P.Alternatives to antibiotics for the control of bacterial disease in aquaculture[J].Current Oinion in Microbiology，2011，14（3）：251-258.

[3] LUPO A，SéBASTIEN C，BERENDONK T U.Origin and evolution of ant-ibiotic resistance：the common mechanisms of emergence and spread in water bodies[J].Frontiers in Microbiology，2012，3（1）：18.

[4] SHIMIZU T，SHIMIZU S，HATTORI R，et al.In vivo and in vitro effects of macrolide antibiotics on mucus secretion in airway epithelial cells[J].AM J Resp Crit Care，2003，168（5）：581-587.

[5] 农业部渔业局.中国渔业统计年鉴[M].北京：中国农业出版社，2019.

[6] 刘艳莉，胡毅，钟蕾，等.丁酸对动物肠道健康的影响及水产应用前景[J].水产科学，2019，38（2）：276-281.

[7] 郑欣，徐树德，艾庆辉，等.三丁酸甘油酯对动物生长和肠道屏障功能的影响及其作用机制[J].动物营养学报，2018，30（5）：1668-1675.

[8] DONG L，ZHONG X，HE J，et al.Supplementation of tributyrin improves the growth and intestinal digestive and barrier functions in intrauterine growth-restricted piglets[J].Clinical Nutrition，2015，35（2）：399-407.

[9] 翟秋玲，张春晓，孙云章，等.三丁酸甘油酯和甘露寡糖对菊黄东方鲀生长性能、体组成及肠道健康指标的影响[J].动物营养学报，2014，26（8）：2197-2208.

[10] 曹阳.三丁酸甘油酯对肉鸡生产性能和肠道发育影响的研究[D].泰安：山东农业大学，2016.

[11] AOAC.Official methods of analysis of association of official analytical chemists（16th ed.）[M].Arlington，AOAC，1995.

[12] LIU M，GUO W，WU F，et al.Dietary supplementation of sodium butyrate may benefit growth performance and intestinal function in juvenile grass carp（Ctenopharyngodon idellus）[J].Aquaculture Research，2017，48（8）：4102-4111.

[13] FAN Z Y，DENG J P，LIU G H，et al.Study on the effect of γ-aminobut-yric acid on the reproduction performance and internal hormone levels in growing pigs[J].Chinese Journal Animal Nutrition，2007，19（4）：350-356.

[14] 陈秀梅，王桂芹，徐贺，等.γ-氨基丁酸对建鲤生长和饲料利用及肌肉营养成分的影响[J].中国畜牧杂志，2015，51（13）：53-56.

[15] 乔丽红，洑琴，温超，等.三丁酸甘油酯对建鲤生长、体组成、肠道免疫功能的影响[J].江苏农业科学，2014，42（12）：275-278.

[16] 孙浪，刘臻，郝光，等.丁酸钠对鲫鱼生长和肠细胞增殖的影响[J].中国水产科学，2013，20（4）：893-901.

[17] ROEDIGER，WILLIAM E W.Famine，fiber，fatty acids and failed colo-nic absorption：does fiber fermentation ameliorate diarrhea[J].Journal of Parenteral and Enteral Nutrition，1994，18（1）：4-8.

[18] 郭建林，马恒甲，孙丽慧，等.不同精、青饲料比例对草鱼生长、形体及肌肉营养成分的影响[J].浙江海洋学院学报（自然科学版），2012，31（6）：503-508.

[19] PIVA A，MORLACCHIUL M.Sodium butyrate improves growth perfor-mance of weaned piglets during the first period after weaning[J].Ital An-imal Science，2002，1（1）：35-41.

[20] LACORN M，GOERKE M，CLAUS R.Inulin-coated butyrate increases ileal MCT1 expression and affects mucosal morphology in the porcine ileum by reduced apoptosis[J].Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition，2010，94（5）：670-676.

[21] 田莉.丁酸钠对草鱼肠道、鳃和机体健康及肌肉品质的作用及其机制[D].雅安：四川农业大学，2017.

[22] HABTE-TSION H M，REN M，LIU B，et al.Threonine affects digestion capacity and hepatopancreatic gene expression of juvenile blunt snout bream（Megalobrama amblycephala）[J].British Journal of Nutrition，2015，114（4）：533-543.

[23] W. H E，ZHOU X Q，FENG L，et al.Dietary pyridoxine requirement of juvenile Jian carp（Cyprinus carpiovar Jian）[J].Aquaculture Nutrition，2009，15（4）：402-408.

[24] DONG L，ZHONG X，HE J，et al.Supplementation of tributyrin improves the growth and intestinal digestive and barrier functions in intrauterine growth-restricted piglets[J].Clinical Nutrition，2015，35（2）：399-407.

[25] 钟翔，黄小国，陈莎莎，等.丁酸钠对断奶仔猪生长性能和肠道消化酶活性的影响[J].动物营养学报，2009，21（5）：719-726.

[26] 杨在宾，邹杨，杨维仁，等.微囊丁酸钠对肉仔鸡肠道消化酶活性的影响[J].飼料工业，2011（增刊2）：27-29.

[27] RISLEY C R，KORNEGAY E T，LINDEMANN M D.Effect of feeding organic acids on selected intestinal content measurements at varying times post weaning in pigs[J].Journal of Animal Science，1992，70：196-206.

[28] 朱晓萍，张德福.几种酸化剂对断奶仔猪胃酸分泌、胃肠道消化酶活性和微生物菌群的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2007（3）：31-33.

[29] MINEO H，HASHIZUME Y，HANAKI Y，et al.Chemical specialty of short-chain fatty acids in stimulating insulin and glucagon secretion in sheep[J].Journal of Animal Physiology，1994，267：E234-E241.

[30] 郑欣，徐树德，艾庆辉，等.三丁酸甘油酯对动物生长和肠道屏障功能的影响及其作用机制[J].动物营养学报，2018（5）：65-72.

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