几种典型生物与化学杀菌剂对西瓜枯萎病菌的抑菌作用

摘要：采用管碟法测定８种典型生物与化学农药制剂对西瓜枯萎病菌（尖孢镰刀菌西瓜专化型，Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ　ｆ．　ｓｐ．　ｎｉｖｅｕｍ）的抑菌活性。结果表明，代森锰锌、盐酸吗啉胍、中生菌素、春雷霉素对西瓜枯萎病菌无抑菌活性，多菌灵、枯草芽孢杆菌、甲基托布津、乙蒜素对西瓜枯萎病菌具有较强抑菌活性，抑菌圈半径依次为９．６、７．５、４．８、３．５　ｍｍ。采用生长速率法测定药剂对西瓜枯萎病菌的相对抑菌率及ＥＣ５０，结果表明，多菌灵的抑菌活性最强，持效期大于１４　ｄ，　１６　ｍｇ／Ｌ处理药后１４　ｄ相对抑菌率仍为１００％；其次为生物农药活菌制剂枯草芽孢杆菌，其ＥＣ５０为１．４３７　２　ｍｇ／Ｌ，是用于防治西瓜枯萎病的较理想药剂。

关键词：西瓜枯萎病菌；杀菌剂；枯草芽孢杆菌；室内毒力测定

中图分类号：Ｓ４３６．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０12）24－5646-04

西瓜枯萎病是西瓜主要病害之一，病原为西瓜枯萎病菌［尖孢镰刀菌西瓜专化型，（Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ　ｆ．　ｓｐ．　nｉｖｅｕｍ　（Ｅ．　Ｆ．　Ｓｍｉｔｈ）　Ｓｎｙｄｅｒ　＆　Ｈａｎｓｅｎ］，在土中可存活８～１０年时间，是典型的土传病害，也属种传病害，西瓜种子的种壳、子叶和胚轴等各部位均可携带西瓜枯萎病病原［１－５］。病菌从西瓜根系侵入，引起维管束褐变腐烂，导致瓜秧枯死，严重影响西瓜产量，素有“西瓜癌症”　之称［６，７］。由于不合理轮作，连作障碍加重，由于化学药剂大量使用，西瓜枯萎病菌抗药性不断增强，田间西瓜枯萎病的危害逐年增重，已成为制约西瓜产业健康发展的主要因素之一。中国瓜农主要采用化学农药防治西瓜枯萎病。据报道，７０％甲基托布津ＷＰ、５０％多菌灵ＷＰ、７５％百菌清ＷＰ、５０％代森锰锌ＷＰ、４０％美邦治萎（福美双·甲硫）ＷＰ，以及黄蒿、中生菌素、农抗１２０等药剂对西瓜枯萎病有一定的防治效果［6-10］，但尚未彻底解决西瓜枯萎病难题。试验通过比较几种典型生物与化学杀菌剂对西瓜枯萎病菌的室内毒力，以期为后续深入开展枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｕｂｔｉｌｉｓ）防治西瓜枯萎病打基础，为采用生物农药防治西瓜枯萎病、综合治理西瓜枯萎病提供理论指导。

１ 材料与方法

１．１ 供试病菌

西瓜枯萎病菌分离自２０１１年湖北省武汉市江夏区瓜农提供的病株，经室内纯化、形态学显微观察鉴定、柯赫氏法则回接试验证明。菌种保藏于湖北省生物农药工程研究中心。菌种于ＰＤＡ　培养基上培养４　ｄ　后供试验用。同时采用ＰＤＢ液体培养基２８　℃、１５０　ｒ／ｍｉｎ摇瓶培养４　ｄ，２５０　ｍＬ三角瓶每瓶装量１００　ｍＬ　。ＰＤＡ培养基、ＰＤＢ培养基制作参照文献［１１］。

１．２ 供试杀菌剂

２０％盐酸吗啉胍可湿性粉剂（东莞市瑞德丰生物科技有限公司，以下简称盐酸吗啉胍）；７０％甲基托布津可湿性粉剂（陕西美邦农药有限责任公司，以下简称甲基托布津）；８０％代森锰锌可湿性粉剂（美国仙农有限公司，以下简称代森锰锌）；８０％多菌灵可湿性粉剂（陕西美邦农药有限责任公司，以下简称多菌灵）；８０％乙蒜素乳油（天津汉邦植物保护剂有限责任公司，以下简称乙蒜素）；３％中生菌素可湿性粉剂（福州凯立生物制品有限公司，以下简称中生菌素）；６％春雷霉素可湿性粉剂（陕西韦尔奇作物保护有限公司，以下简称春雷霉素）；　１　０００亿活芽孢／g枯草芽孢杆菌原药（湖北康欣农用药业有限公司，以下简称枯草芽孢杆菌）。

１．３ 方法

１．３．１ 不同药剂对西瓜枯萎病菌的抑菌圈测定 采用管碟法［１２］测定几种生物与化学杀菌剂对西瓜枯萎病菌的抑菌活性。取６　ｍＬ摇瓶发酵培养４　ｄ的西瓜枯萎病菌菌液，加入至94　ｍＬ　５０　℃的ＰＤＡ培养基中，摇匀后倒平板，制成含病菌ＰＤＡ平板。用无菌水将供试８种农药制剂均配置成１００　ｍｇ／Ｌ溶液。每平板中各放置３个已灭菌牛津杯，取供试药剂２００　μＬ置入其中２个牛津杯中，另１个牛津杯为无菌水对照，每处理重复４次。２８　℃培养室中黑暗培养３　ｄ，采用游标卡尺测量抑菌圈半径［１３，１４］。

２ 结果与分析

２．１ 杀菌剂对西瓜枯萎病菌抑菌圈的作用

２．２ 杀菌剂对西瓜枯萎病菌的相对抑菌率

１）甲基托布津对西瓜枯萎病菌的相对抑菌率随着药剂浓度的升高而增大，菌落直径则随着药剂浓度升高而减小，甲基托布津１、２、４、８、１６　ｍｇ／Ｌ不同浓度处理６　ｄ，菌落直径分别为（７．４５±０．１３）、（７．３８±０．２９）、（７．０５±０．１３）、（５．３８±０．２６）、（２．８５±０．１３）ｃｍ，相对抑菌率分别为４．４９％±１．６６％、５．４５％±３．８３％、９．６２％±１．６６％、３１．０９％±３．３７％、６３．４６％±１．６６％。１６　ｍｇ／Ｌ处理相对抑菌率最高，极显著高于其他处理，１、２、４　ｍｇ／Ｌ处理之间无极显著差异。据试验观察，药后１４　ｄ，各浓度处理菌落均长满平板，与对照无明显差别。

２）多菌灵对西瓜枯萎病菌具有显著抑菌作用，１、２、４、８、１６　ｍｇ／Ｌ处理药后６　ｄ，各浓度处理均没有菌落形成。药后１４　ｄ，１、２、４、８、１６　ｍｇ／Ｌ处理菌落直径依次为（１．７３±０．１１）、（１．３５±０．０６）、（０．７８±０．２５）、（０．１３±０．０８）、（０．００±０．００）ｃｍ，相对抑菌率依次为７８．９６%±２．７０%、８３．５４%±１．５７%、９０．５５%±６．０８%、９８．４８%±１．８３%、１００．００%±０．００%，其中８、１６　ｍｇ／Ｌ高浓度处理抑菌率高，极显著高于其他处理，１６　ｍｇ／Ｌ抑菌率最高，药后１４　ｄ相对抑菌率仍为１００％，具有较强的持效性。另外，据试验观察，供试多菌灵各浓度处理菌落边缘界限清晰明亮，菌丝团隆起，平行扩展生长受到抑制。

３）乙蒜素抑菌活性相对较弱，１、２、４、８、１６　ｍｇ／Ｌ处理药后６　ｄ西瓜枯萎病菌菌落直径分别为（７．３６±０．１２）、（７．１６±０．１３）、（７．０６±０．１３）、（６．４４±０．２１）、（６．０３±０．１２）ｃｍ，相对抑菌率依次为５．６１％±１．６２％、８．１７％±１．６３％、９．４６％±１．６０％、１７．４７％±２．７４％、２２．６８％±１．５９％，低浓度处理１、２、４　ｍｇ／Ｌ之间相对抑菌率无极显著差异。据试验观察，药后１４　ｄ，各浓度处理与甲基托布津一样，西瓜枯萎病菌均长满平板。

４）枯草芽孢杆菌的相对抑菌率随着浓度的升高而增大，１、２、４、８、１６　ｍｇ／Ｌ处理药后６　ｄ菌落直径分别为（４．９０±０．２３）、（３．４８±０．１８）、（２．０５±０．０９）、（１．７５±０．１３）、（１．４１±０．１１）ｃｍ，相对抑菌率依次为３８．８１％±６．１１％、５６．５６％±５．１６％、７４．４１％±２．３９％、７８．１８％±３．０９％、８２．３６％±２．８８％，　高浓度４、８、１６　ｍｇ／Ｌ处理间无极显著差异，低浓度１、２　ｍｇ／Ｌ处理间差异极显著。另据试验观察，药后１４　ｄ，枯草芽孢杆菌各处理平板上均有西瓜枯萎病菌菌丝分布，同时满布枯草芽孢杆菌菌落，平板上的西瓜枯萎病菌菌丝密度明显小于其他处理。

２．３ 杀菌剂对西瓜枯萎病菌的毒力比较

３ 小结与讨论

试验采用抑菌圈法比较８种典型生物及化学农药制剂对西瓜枯萎病菌的抑菌活性。其中４种（代森锰锌、盐酸吗啉胍、中生菌素、春雷霉素）对西瓜枯萎病菌未形成明显的抑菌圈，无抑菌活性，因此不宜采用上述药剂防治西瓜枯萎病。甲基托布津、多菌灵、乙蒜素、枯草芽孢杆菌对西瓜枯萎病菌具有抑菌活性，存在明显的抑菌圈，其中多菌灵抑菌圈最大，其次是枯草芽孢杆菌。

多菌灵对西瓜枯萎病菌具有很强抑菌活性，这与已有报道［７，１０］一致，试验发现其持效期在１４　ｄ以上。据试验观察，药后１４　ｄ多菌灵各浓度处理西瓜枯萎病菌菌落隆起，平行扩展生长受阻，并且菌落边缘界限清晰清亮，而同期其他药剂处理的菌丝已与空白对照一样布满平板。试验证实多菌灵可作为西瓜枯萎病田间防治的主要药剂，生产中应注意与其他药剂轮换使用，以避免或延缓病菌产生抗药性［７］。

枯草芽孢杆菌是一种嗜温、好氧、产芽孢、易培养、耐储存、生理特征多样的革兰氏阳性细菌，在自然界中广泛存在，对人畜无毒无害，不污染环境，能产生多种抗菌素和酶，具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力。田间定殖通过营养竞争和位点竞争、分泌抗菌物质、溶菌作用以及诱导抗性等机制达到生防目的，已广泛应用于作物病害治理，防治对象主要为丝状真菌所引起的植物病害［１５－１７］，如水稻纹枯病、小麦纹枯病、番茄叶霉病、豆类根腐病、苹果霉心病、棉花立枯病、棉花枯萎病，用于防治西瓜枯萎病的报道较少。

试验中，枯草芽孢杆菌对西瓜枯萎病菌具有较强抑菌活性，与已有报道一致［１８－２０］，高浓度处理间无极显著差异，低浓度处理间差异极显著，表现出活菌制剂的特点。另据试验观察，药后１４　ｄ，甲基托布津及乙蒜素各浓度处理平板均长满西瓜枯萎病菌菌丝，枯草芽孢杆菌各浓度处理则表现为两种微生物均布满平板，但西瓜枯萎病菌菌丝密度明显低于甲基托布津处理和乙蒜素处理，表现出较好的拮抗特性，其抑菌活性强于常用杀菌剂代森锰锌、盐酸吗啉胍、甲基托布津、乙蒜素、中生菌素、春雷霉素，具有推广应用潜力。枯草芽孢杆菌防治西瓜枯萎病的抑菌机理、田间应用技术等有待后续深入研究。

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