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乙肝病毒血清学标志物定量与HBV,DNA的相关性分析

时间:2022-05-02 14:50:04  浏览次数:

【摘 要】目的:观察并分析乙肝患者血清乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA )与乙肝病毒血清标志物(HBV-M)定量的相关性。方法:收集门诊和住院260例乙肝患者,用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和化学发光酶免疫法(CLEIA)同检测HBV DNA和HBV-M。结果:“大三阳”和“小三阳”所占比例最高,其低、中、高HBV DNA病毒载量分别为15.6%,41.7%,42.7%和53.7%,41.7%,4.6%;“大三阳”组比“小三阳”组的DNA病毒载量更高,差异对比有统计学意义(P<0.05)。结论:HBV DNA与HBeAg呈正相关,HBV DNA和HBV-M联合检测能更好地监测乙型肝炎病毒的复制情况,对监测疗效和判断预后有重要价值。

【关键词】乙肝病毒血清标志物;荧光定量PCR;乙型肝炎病毒核酸

【中图分类号】R473 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2019)02-0270-01

Study on the correlation between seruln markers of hepatitis B and HBV DNA

【Abstract】Objective: To investigate the correlation between HBV-M and HBV DNA levels.Methods:DNA and HBV-M in 260 cases of HBV were detected by FQ-PCR and CLEIA.Results:When comparing big 3 this world,small 3 this world for all the sample proportion highest.There, low, medium and high DNA viral load accounted for 15.6% , 41.7%,42.7% and 53.7% , 41.7%,4.6% . The DNA viral load in big 3 this world group was higher than that in small 3 this world group, and there were statistical differences among groups (P<0.05) Conclusion:DNA is positively correlated with HBeAg.Combined detection of DNA and HBV-M can effectively monitor HBV replication,it has important value in monitoring curative effect and judging prognosis.

【Key words 】HBV-M; FQ-PCR; HBV DNA

前言

乙肝病毒血清標志物(HBV-M)检测是临床诊断、治疗、分析和判断病程及传染性的重要指标之一,即俗称的“乙肝两对半”。目前临床上检测HBV的方法主要有ELISA、CLEIA和FQ-PCR,CLEIA因其灵敏度高、特异性好、线性范围宽、标志物的有效期长、自动化程度高等优点也慢慢广泛应用于乙肝病毒感染的检测中[1]。随着对乙型肝炎病毒分子生物学研究的深入以及FQ-PCR检测方法的普遍开展,对HBV-M的临床意义已有了新的认识,FQ-PCR可直接监测血清中HBV DNA的复制情况,能区别诊断乙肝的早期感染、恢复期感染和现症感染,也能对乙肝的突变株进行诊断。本研究用FQ-PCR技术收集HBV DNA阳性患者血清,同时用CLEIA法检测乙肝两对半,现将分析结果总结如下。

1 材料与方法

1.1 研究对象

分析2014年5月至2017年5月在我院就诊的260例乙肝患者,其中男性140例,女性120例,年龄在13-76岁,平均年龄42.5±6.2岁。研究对象符合中国慢性乙肝防治指南诊断标准[2],近3个月内未抗病毒药物治疗。排除标准:合并严重心脑血管疾病;伴有肝囊肿与肿瘤。每名患者均抽空腹血3ml于红色真空采血管内,并及时分离检验。

1.2 检测方法

上海宏石基因扩增仪和湖南圣湘生物有限公司乙肝基因内标法检测DNA。每次均按阴性、低阳、高阳、标本、低阳质控的顺序检测HBV DNA。阴性质控监测假阳性,内标监测假阴性。检测范围为5.0E+02~1.0 E+08U/L,检测结果>5.0E+02U/L预示HBV DNA阳性。HBV-M由安图A2000i全自动免疫分析仪和原装配套试剂检测。操作严格按照使用说明书进行,每日室内质量控制通过后,方可进行检测。

1.3 统计学分析

本研究采用SPSS18.0软件分析对数据进行统计学处理,所有计数资料采用 χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 260例患者HBV-M结果及HBV DNA病毒载量分布情况

在260例患者中HBV-M模式有7种,HBsAg+, HBsAb+,HBeAg+ ,HBeAb+, HBcAb+分别用12345代表,以“大三阳”和“小三阳”所占例数最多,分别为36.9%和41.5%。HBsAg阳性组HBV DNA阳性率高达99.6%。“大三阳”的低、中、高HBV DNA病毒载量分别占全组的15.6%,41.7%,42.7%,主要集中在中、高病毒载量区段;“小三阳”低、中、高DNA病毒载量分别占全组的53.7%,41.7%,4.6%,主要集中在低、中病毒载量区段。“小二阳”(15)的低、中、高DNA病毒载量分别占全组的21.2%,69.7%,9.1%,主要集中在中病毒载量区段。

2.2“大三阳”和“小三阳”的比较

3 讨论

CLEIA法检测乙肝血清学标志物灵敏度高,较传统的ELISA的灵敏度高10倍左右;特异性强,与结构类似物质间交叉反应少,重复性好、批间批内质控稳定。FQ-PCR是进行临床基因诊断的有力手段,它采用完全闭管检测,不需要PCR后处理,避免了交叉污染,同时采用实时检测技术,定量准确率高[3]。

在本次研究中,260例标本的HBV-M模式有7种,其中以“大三阳”和“小三阳”所占例数最多,分别是36.9%和41.5%。一般认为,“大三阳”患者体内病毒在人体内处于不断复制状态,有较强的传染性,“小三阳”表示病毒复制活动及传染性较弱。“大三阳”和“小三阳”组的标本,差异有统计学意义(P < 0.05),可以认为“大三阳”组和“小三阳”组的病毒载量均数不同,“大三阳”组比“小三阳”组的DNA病毒载量更高,反应了这两种方法在检测患者乙肝病毒感染病程方面的相关性较好。同时,“大三阳”组DNA的拷贝数显著高于其他模式,可以看出HBeAg阴性表达并不代表乙型病毒性肝炎患者体内无HBV复制,与文献报道结果相一致[4,5]。小三阳患者为低水平复制状态,并不表示患者体内没有病毒复制,仅HBV-M测定无法准确判断,仍需HBV-DNA的定量检测。

乙肝15阳性又称“小二阳”,说明患者的传染性比较弱,若是患者患有急性或慢性肝炎,说明患者还是有传染性的。在此次研究中,有33例“小二阳”,它的低、中、高DNA病毒载量分别占全组的21.2%,69.7%,9.1%,主要集中在DNA病毒载量区段。提示该组的病人仍具有较强的病毒复制和传染性,此情况可能是血清转换期。HBeAg是HBV活动期的指标,其出现通常为一过性,提示HBV复制和血清具有强传染性[6]。从表2-1中可以看出HBeAg+标本主要集中在中高DNA病毒载量区段,可见HBeAg与HBV DNA病毒载量有很强的相关性。

HBsAg和抗HBs共存约占5.4%,和文献报道一致,造成共存的原因主要有不同血清型HBV的感染、HBVS基因突变、HBV再活动等,12双阳性可能是由于患者感染不同血清型HBV[7,8]。HBV DNA阳性标本中,HBsAg阳性组HBV DNA阳性率高达99.6%,表明乙型肝炎病毒复制与HBsAg呈显著正相关,但其含量与HBV复制水平和传染性无关,HBsAg阴性患者也可以检出DNA复制。乙肝病毒虽然构造非常简单,但是它也有一个外壳。这种外壳是一种蛋白质,它的出现标志着有乙肝病毒的存在,且可以反映早期HBV感染。13模式有5个,但多集中在中、高HBV DNA病毒载量区段,据分析可能是HBV的早期感染。邵建敏[9]认为,应临床应动态观察1345模式的血清标志物定量结果和HBV DNA载量变化。

综上所述,FQ-PCR检测DNA病毒载量与CLEIA检测乙肝病毒血清标志物在判断患者乙肝病毒感染病程方面有较好的相关性,联合FQ-PCR和CLEIA,动态监测HBV DNA病毒载量和HBV-M,能更准确反映体内HBV的复制情况和传染性,正确指导临床用药。

参考文献

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[2]李黎,崔富强,张国民,等.乙型肝炎诊断标准解读[J],中华预防医学杂志,2014(9):758-761.

[3]程刚,何蕴韶,周新宇.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒[J].中华医学检验杂志,1999,22(3):135-135.

[4]唐芳玫.乙型肝炎病毒DNA與血清标志物的关系[J].检验医学与临床,2010,7(1):28-29

[5]侯玲,刘韧,龙训琴,邓红艳,管雯.乙型病毒性肝炎患者血清HBV DNA与HBeAg、HBsAg的相关性分析[J].检验医学与临床,2018,15(7):936-939.

[6]韩丽蓉.乙型肝炎乙肝五项检查的临床意义.临床合理用药,2012,3,5(3B):109-109.

[7]傅晓春,陈静,叶爱珠,等.医院就诊人群HBsAg与抗HBs双阳性HBV感染者的流行病学与分子病毒学特征[J].临床检验杂志,2017,35(1):47-52.

[8]刘香荣.98例乙肝患者血清HBsAg Ag与抗HBs同时阳性的特殊模式分析[J].济宁医学院学报,2004,27(4):45-45.

[9]邵建敏.乙肝两对半三种模式与HBV DNA载量相关性分析.求医问药,2012,10,6(2):718-718.

基金项目:

成都市医学科研项目(2018045)

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