蓖麻蚕对辛硫磷农药的代谢抗性机制

材料与方法

1.1材料与药剂

供试农药：40%辛硫磷乳油，连云港立本农药化工有限公司生产。供试蓖麻蚕品种：海蓝（B7）品种，由中国农业科学院蚕业研究所提供，用常规方法催青，饲养至5龄第3天，选取发育一致的正常蓖麻蚕幼虫个体。供试蓖麻叶：由中国农业科学院蚕业研究所试验场提供，采摘未施用农药的新鲜5龄蓖麻叶。

1.2菌种与试剂

大肠杆菌DH5a感受态细胞，由笔者所在课题组制备。PrimeScrip RT reagent Kit with gDNA Eraser（Perfect Real Time）、SYBR Premix Ex Taq^TMⅡ（Tli RNaseH plus）、pMD19-T Simple Vector等，购自大连宝生物工程公司。TRIzol试剂，购自Promega公司。

1.3辛硫磷对蓖麻蚕LC₅₀的测定

采用浸叶法测定辛硫磷对蓖麻蚕5龄第3天24 h的LC₅₀。参照农药公司推荐的使用浓度和预试验测定的24 h蓖麻蚕全部死亡和全部存活的浓度，正式试验在此浓度范围内重新设定浓度，以蒸馏水浸泡蓖麻叶为对照。将40%辛硫磷原液分别稀释成35、40、45、50、55、60、65、70 mg/L，共8个浓度梯度。将蓖麻叶切成1 cm²左右的方片，在辛硫磷配制液中浸泡10 s，自然晾干后供蓖麻蚕食用。采用添食毒蓖麻叶1g/头的标准，取饲养20头5龄第3天蓖麻蚕为1个试验组，每个浓度3次重复，共计60头。将喂食添加辛硫磷农药后的蓖麻蚕置于温度为25℃、相对湿度80%的环境中饲养，24 h后观察并记录中毒情況及死亡数。

采用Abbott公式计算添食辛硫磷后蓖麻蚕的死亡率，当对照组死亡率为0时，试验组死亡率=[（试验蚕数-药后活蚕数）/试验蚕数]×100%；当对照组死亡数<10%时，试验组死亡率=[（试验组死亡率-对照组死亡率）/（1-对照组死亡率）]×100%。在Excel中计算出辛硫磷对蓖麻蚕的毒力回归方程和半致死浓度。

1.4蓖麻蚕乙酰胆碱酯酶基因的克隆

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