印楝种子粗提物诱导烟草炭疽病抗性的生理效应

材料，研究印楝对烟草炭疽病的诱抗作用，利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术探究8个相关抗病基因的诱导表达，并测定印楝粗提物对烟草抗氧化酶活性和总酚含量变化的影响及烟草炭疽病诱导抗病效果，为利用印楝进行烟草炭疽病的生物防治提供理论依据。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

供试烟草品种K326由广东烟草南雄科学研究所提供。印楝种仁采集自四川，低温干燥，粉碎过20目筛。烟草炭疽病菌（C. nicotianae）由华南农业大学植物病理研究室提供。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 印楝诱导烟草炭疽病抗性测定

1. 2. 1. 1 烟苗培育 参照李海宾和于嘉（2012）的方法在华南农业大学温室进行烟苗培育，以大田土壤装钵，每钵1000 g，在14～24 ℃、光照12 h/d、湿度30%条件下育苗，每周施一次营养液，每钵约50 mL。

1. 2. 1. 2 接种菌液制备 参照李东升（2010）的方法，将炭疽病病原菌接种在PDA培养基上（200 g/L马铃薯，20 g/L葡萄糖，15 g/L琼脂）28 ℃培养7 d，待充分产孢后，加入含0.02%（v/v）吐温-20的无菌水10 mL浸泡15 min，用无菌棉签洗下孢子和菌丝体，经无菌脱脂棉过滤，除去菌丝体，稀释成1×107个/mL的孢子悬浮液。

1. 2. 1. 3 接种方法 烟苗培养至5～6片叶时，以每株烟草根施60 g印楝种子粉末为处理，以不施用印楝种子粉末为对照。在温度25～26 ℃、湿度55%～60%条件下保湿3 d后接种。接种方法参照宾金华等（2000）方法，烟草叶片表面用无菌水擦拭干净，将少量细金刚砂（600目）撒在待接种的烟草叶面上，手指在叶面上轻轻摩擦，然后用1×107个/mL的炭疽病孢子悬浮液涂抹于叶片表面直至形成一层水膜，接种后放置在温度25～26 ℃、湿度55%～60%的恒温箱中黑暗培育12 h，黑暗处理后放回温室中培育，温室中提供稳定光源，光照时间为12 h/d，温度控制在25～26 ℃，湿度为55%～60%。每處理接种30株烟苗，发病后逐株调查病情指数。

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