酶抑制法检测蔬菜中有机磷农药残留

[摘 要]随着我国农业产业化发展水平的不断提升，农产品越来越依赖于农药、抗生素和激素等外源物质。且由于存在不合理的农药使用方式，造成了我国农产品的农药残留量超标，直接影响了我国的农业贸易，对人体的生命安全造成了严重的影响。本文通过对农药残留检测的重要性分析，结合农药残留的检测方法和步骤来对使用较为广泛的酶抑制法检测蔬菜中有机磷农药残留进行阐述。

[关键词]检测酶；抑制法；有机磷

[中图分类号]S481.8 [文献标识码]A

1 农残检测的重要性

随着我国农业产业化的不断发展，农产品的生产对农药、抗生素和激素等外源物质的依赖性不断增加。我国农产品的农药用量一直以来都处于较高的水平，且由于不合理的使用方法造成农产品中的农药残留量超标，直接影响到了消费者的食用安全，甚至造成消费者中毒或死亡。此外，农药残留超标也会对农产品的贸易造成直接性的影响，全球各国也高度重视农药残留的问题，对各类农产品制定了严格的农药限量标准。

农残检测是通过分析农药残留检测仪检测到农药残留含量来判断蔬菜的农药残留量是否超标。有机磷和氨基甲酸酯类农药是目前我国使用最多的农药，且多数被明确禁止使用在蔬菜、瓜果上。由于该类农药在进入生物体后会与乙酰胆碱酶结合，并分离难度大，即直接抑制了乙酰胆碱酶的活性，造成生物体神经传导中的乙酰胆碱无法水解而过度积累，致使神经亢奋，继而出现中毒症状，严重者直接死亡。因此，必须重视农残检测的重要性。

2 快速检测的基本方法

常见的快速检测方法主要有三种：

（1）通过检测原理创新而比传统检测方法用时要短的方法，主要有乙酰胆碱酶抑制法、酶联免疫法、生物传感器法和分子印迹法等。（2）通过简化程序和提高效率来减少用时的方法，主要有SPE固相萃取法分离目标农药、ASE快速溶剂萃取法提取目标农药等。（3）采用自动化、信息化或一体化设计而提高效率的方法，主要有流动注射仪代替化学滴定法测定多种无机农药、自动进样器等。

目前普遍使用的检测方法为采用酶抑制法的便携式农药残留检测仪，其工作原理为：在有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酶的活性，且抑制率与农药种类和含量相关的基础上，通过测定抑制率的大小来对蔬菜的农药残留是否超标做出判断。由于酶抑制率法具备成本较低、灵敏度较高、操作简易和检测数据可靠等特点，被市场广泛使用。

农药残留检测仪器的优势在于：（1）生化分析极易受温度影响，需在恒温条件下进行预反应，而农药残留速测仪不仅具备测试功能，还具备恒温水浴和定时等功能，以确保预反应条件和提高检测准确率。（2）速测仪使用较为方便，无需调整波长，按键操作即可选择检测所需的测试波长。

3 农残快速检测操作流程与结果判定

3.1 检测原理

农药残留快速检测仪是根据国家标准和农业标准方法中的酶抑制率法，结合快速检测方法研发的全新食品安全检测设备，具有较高的准确率和检测速率。

常规情况下，酶催化乙酰胆碱水解，水解产物和显色剂反应后生成黄色物质，通过分光光度计检测412nm下吸光度随时间的变化值来计算抑制率，并根据抑制率来对样品中的有机磷或氨基甲酸酯类农药的残留量是否超标做出判断。

3.2 农残检测操作流程

3.2.1 前期准备：（1）开启农药残留检测仪自检和预热10-15分钟，以确保光源稳定。（2）登录农药残留检测系统，进行端口设置和检测仪的连接工作。（3）清除前一天对照液的参照值和检测信息。

3.2.2 试剂配剂制备：（1）缓冲液：将1包缓冲剂加入500ml蒸馏水中，充分溶解制成偏碱性的磷酸缓冲液，常温下保存。（2）显色剂：取1瓶显色剂，加入25ml缓冲液，充分溶解后放置于4℃冰箱保存，使用时取100ul。（3）底物：取一瓶底物，加入2.5ml蒸馏水，溶解后放置于4℃冰箱保存，使用时取20ul。（4）胆碱酯酶：酶抑制剂可直接取用，用时取100ul，放置于4℃冰箱保存。

3.2.3 对照液的制备和测试：（1）对照液的制备：将100ul酶和2.5ml缓冲液加入比色皿中，在混合均匀后加入100ul的显色剂和20ul底物。将其摇匀后立即放入仪器中进行对照测试。（2）对照液测试结果保存：正常的测试结果处于0.3-0.8之间，假若超出范围，则表示操作有误或显色时间过长，需重新测试，在确认合格后才可保存检测结果。

3.2.4 待测样品信息的录入：根据待测样品的编号来录入相应样品的名称、检测标准、生产单位和被检单位等。

3.2.5 检测样品液的制备：（1）将菜叶剪成1cm的方形小片（大约2g重）或4g的块茎放入三角瓶内，加入缓冲液10ml，振荡提出1-2min后过滤，将清液（待测液）取出。（2）取100ul酶，2.5ml待测液，加入比色皿中，混合均匀，并静置10min后，加入100ul显色剂或20ul底物。将比色皿盖上颠倒两次后立刻放入仪器中进行样品测试。

3.3 农残检测结果判定

以分光光度计测试（412nm波长）时，按下式计算抑制率：

抑制率（%）=[（ΔΑ0-ΔΑt ）/ΔΑ0]×100

以农药残留快速测试仪检测时其抑制率一般可自动计算。（1）样品的抑制率低于50%，则表明试样中的农药残留性低，该样品合格；（2）样品的抑制率超过50%，则表明试样中的农药残留量较大，该样品不合格，需暂停售卖，并对其进行追踪整改和上报相关主管部门；（3）样品的抑制率處于40%-50%之间，则表明为疑似农残超标样品，需重新检测，假若重测抑制率依旧超过40%，则需采用气象色谱仪器分析法来深入检测确定或暂停销售，并进行追踪整改和上报相关主管部门。

4 结语

为避免出现因蔬菜农药残留量超标而造成的人体中毒现象，应加强对蔬菜的农药残留检测。采用酶抑制法来检测蔬菜中有机磷农药残留，结合农药残留速测仪的使用，显著提高了检测速率和准确率，为我国农产品的健康发展提供可靠的保障。

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