ELISA法检测HBsAg假阳性原因分析

摘要：目的 了解ELISA法检测HBsAg造成假阳性的原因。方法 采集160例ELISA法检测HBsAg阳性标本进行胶体金法检测，二者不符合者，重新抽血进行ELISA和胶体金法复检。结果 初检160例HBsAg阳性标本有7例假阳性。结论 ELISA法检测HBsAg受多种因素影响，只有掌握ELISA法检测HBsAg造成假阳性的影响因素，才能在工作中减少差错事故。

关键词：ELISA；HBsAg；假阳性；影响因素

Abstract：Objective Detection of HBsAg ELISA method to cause false positive.Methods Collection of 160 cases of ELISA was detected in HBsAg positive specimens were detected by colloidal gold method， the two do not meet， re were ELISA and colloidal gold method review.Results The initial inspection in 160 HBsAg positive cases and 7 false positive .Conclusion Detection of HBsAg ELISA is affected by many factors， only to master the detection of HBsAg ELISA factors causing false positive， can reduce errors and accidents at work.

Key words：ELISA； HBsAg； False positive； Influencing factors

HBV感染呈世界性流行，我国属高发区。人群感染HBsAg的阳性率约为9.09%[1]， HBsAg阳性将会给人们带来招工，出国等烦恼，而且部分持续感染者可发展为肝硬化，原发性肝癌，因此，实验室准确检测HBsAg显得异常重要。目前临床上常用灵敏度高，特异性强的ELISA法检测HBsAg。在日常工作中，由于溶血、离心等因素将会影响ELISA检测，造成HBsAg假阳性，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

1.1.1标本 采集 2011年1月～4月，本院门诊或住院患者ELISA初检HBsAg为阳性的160例患者血清标本。

1.1.2 试剂与仪器 采用上海科华生物工程股份有限公司生产的ELISA试剂盒，艾博生物医药（杭州）有限公司生产的胶体金试剂，北京普朗DNM-9602酶标分析仪。

1.2方法

1.2.1检测方法 按照ELISA试剂盒说明书操作。

1.2.2评定标准 初检HBsAg结果阳性者再用胶体金法检测，两者均为阳性则可报告阳性，若两者检测结果不一致，则重新抽血进行ELISA法和胶体金复检，若两次ELISA检测均为阳性，则直接报阳性，否则，为假阳性。

2结果

ELISA和胶体金检测的结果见表1，表2。

由表1，表2可知，ELISA初检产生了7例假阳性，其中3例为孕妇，2例标本溶血，2例门诊患者由于时间原因，抽取标本后就立即进行了离心，检测。

3讨论

ELISA检测HBsAg受多种因素的影响，主要有以下几点：

3.1选择高质量的试剂是保证结果准确的关键之一，有的厂家酶标板孔底的平整度和透明度差异大，同时显色液的稳定性也较差，这将导致检验结果的假阳性或假阴性增多[2]。

3.2标本溶血 红细胞中含有类过氧化物酶活性物质，这些物质具有与辣根过氧化物酶类似的催化作用。红细胞溶解后，这些物质进入血清中，反应过程中，若反应孔特异性地吸附了这些物质，就会催化底物反应，造成假阳性。溶血的原因很多，主要有物理因素（如机械性破坏、冰冻），化学性因素（如血样接触表面活性剂）和代谢性因素等，检验人员和护士应熟练操作，轻拿轻放。

3.3标本离心 血液尚未完全凝固就离心，分离的血清中可能残留部分纤维蛋白原，它们和酶粘附在酶标板上，可造成非特异性吸附，使本底A值升高，而致假阳性。

3.4孕妇血清中含有高浓度的AFP，能够与固相一抗，标记二抗FC结合或影响它们的结合而造成假阳性[3]。血清中补体、RF、免疫球蛋白聚合物也可以致假阳性结果[4]。

3.5温育 抗原抗体反应需要一定的温度，经过一定的时间才能达到反应的平衡，温育温度和时间应按操作说明规定的要求，否则会影响显色结果，导致错误的检验结果。

3.6洗板 洗板是将酶标板上结合的抗原抗体复合物与其他物质分离，洗涤液浓度太稀，洗板次数太少以及洗板停留时间太短等都会导致HBsAg假阳性，洗涤时所用吸水纸不可重复使用，以免产生交叉污染。

3.7显色与结果判断 必须严格控制显色时间和温度，使用酶标仪检测，肉眼判读结果时，容易漏诊弱阳性标本，显色过程必须封板，封板纸不能重复使用。

3.8其他 标本加样量不准，样品未加在板孔的底部，有微生物污染的样本等都可致假阳性。

ELISA法检测HBsAg的影响因素很多，这就要求我们增强责任感，严格按照操作规程操作，加强业务学习，充分认识和避免以上因素的影响，确保检验结果的准确性。

参考文献：

[1]倪语星，尚红.临床微生物学与检验[M].4版.北京：人民卫生出版社，2010：445.

[2]周红妹，黄小虎.ELISA法检测HBsAg影响因素分析[J].中国热带医学，2006，6（10）：1867.

[3]韩文明，黄燕.ELISA检测HBsAg影响因素的分析[J].中国医学指南，2011，2（4）：49-50.

[4]王民强，周剑波，张廷，等.酶联免疫吸附试验检测HBsAg的应用体会[J].中国误诊学杂志，2011，2（4）：874.

编辑/孙杰

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