常见出血实验模型的建立方法

摘 要:通过对近10年来国内有关出血实验模型的文献资料进行整理与分析,从脑、眼、肺、胃、胰腺和子宫等常见出血部位入手,对出血实验模型的建立方法进行概述,为止血药物的实验室研究提供更多的方法学依据。

关键词:出血部位;动物模型;建立方法

中图分类号:R965.2文献标识码:A文章编号:1673-2197(2009)06-0009-03

出血性疾病是临床常见病和多发病。选择、建立合适的出血实验模型是研究出血性疾病和止血药物的重要手段。探索和研究出血模型的建立方法对于止血药物的筛选和药效学评价等都具有重要意义。近年来,许多学者将致损因素和中西医病因结合起来,应用各自设计的动物模型对止血药物及其作用机制进行了大量的实验研究,其中涉及到脑、眼、肺、胃、胰腺和子宫等常见出血部位。现将不同部位常见出血动物模型建立方法在国内的研究进展介绍如下。

1 脑出血模型

建立稳定、可重复、贴近人类的脑出血(ICH)模型是实验及临床研究的关键。目前常用的ICH模型主要有脑内注入自体血模型、胶原酶诱导ICH 模型、自发性ICH 模型和微气囊植入ICH 模型[1]。实验动物常选用猪和大鼠,有以下几点原因:①猪在解剖、组织、生理、营养代谢等方面与人类极为接近,脑容量较啮齿类动物大20~30倍[2];②大鼠脑血管解剖及生理接近人类。相关实验资料如生理、生化、药理、形态等较多,便于比较研究,大鼠价廉,且易繁殖获得纯种动物,利于实验结果的一致性[3]。

曾锦旗等[4]用颅内直接注血法建立大鼠出血性中风中经络模型以及动脉粥样硬化性家兔出血性中风中经络模型。结果出血性中风大鼠出现明显血肿,组织病理学改变与人类出血性中风中经络相似。兔脑出血模型建立在动脉粥样硬化的基础上,更接近于临床。戴如飞等[5]通过立体定向术向大鼠脑内注入一定量的自体血建立脑出血模型,成功率高(93.3%),方法简便,与临床脑出血相似。研究者认为该模型适合研究脑实质出血的自然过程、病理形态学特点及药物疗效观察。于海洲等[6]在实验研究中发现家兔在造影后经常死亡,或出现昏迷、偏瘫、血尿等并发症,对实验结果存在一定的影响。为此改进了以往经颈总动脉或股动脉插管至主动脉弓的造影方法,参照临床应用的经肱动脉穿刺逆行椎基底动脉造影方法,采用22号套管针穿刺腋动脉法行基底动脉造影,较好地解决兔模型造影死亡率高的问题。

建立蛛网膜下腔出血模型一般采用两种方式[7]:一是将自体动脉血直接注入蛛网膜下腔;二是刺破颈内动脉颅内段某一部位,使血液自动流入蛛网膜下腔。第一种造模方式有侧脑室插管注血法和经额蛛网膜下腔插管注血法等[8,9],但多采用小脑延髓池注射自体动脉血的方法造模。高成等[10]分别采用颈内动脉穿刺法(PIC)、枕大池2次注血法(ACM)和交叉前池注血法(APC)建立大鼠SAH 模型。认为这3种方法制成的模型适用于研究SAH 不同病理生理改变的需要。PIC脑水肿重、病死率高,适用于SAH 后脑损害的机制研究;ACM脑血管痉挛的时间特征与人SAH 后血管痉挛接近,适用于血管痉挛的机制研究;APC血液恒定分布于前循环,病死率低,适用于研究SAH 后急性脑血管痉挛的发病机制。

2 眼出血模型

激光眼内造模法是眼科比较常见的建模方法,早在20世纪60年代初视网膜激光光凝开始即有所发现。20世纪70年代卫煊等[11]用白兔、猫、狗、猴等进行红宝石激光视网膜光凝实验,发现过高能量会引起视网膜出血乃至玻璃体出血。李晟等[12]用FD-Nd:YAG 532固体激光建立典型视网膜出血和视网膜前出血模型。研究者认为激光通过裂隙灯适配器发射,经激光角膜接触镜能准确聚焦于所需照射部位,定位性好,出血位置便于观察,是较理想的眼内出血模型。

钱秋海等[13,14]用胰蛋白酶建立家兔眼内出血模型,眼底镜观察糖视清对家兔眼内出血的影响。大致方法是:用戊巴比妥钠麻醉,50 u/0.2mL胰蛋白酶,球后注射,注射后每5min,用眼底镜观察1次,观察有无出血、渗血,并计算出血量。

3 肺出血模型

司徒勋等[15]通过外源性五羟色胺(5-HT)气管滴入建立新生大鼠肺出血模型,浓度以1×10^-5mol/mL较为适宜。模型制作简便,重复性好,其中弥漫性肺出血占10 %～15 %。研究者认为肺出血可能为5-HT 气管滴入后导致急性缺氧,诱导ET-1分泌所致,因为ET-1参与肺动脉高压形成及增加毛细血管通透性,内源性ET-1的升高是导致肺出血的重要原因。

陈克正等[16]用低温加缺氧建立低温、缺氧两种病因引起肺出血的动物模型;李娟等[17]用高分子右旋糖酐静脉注射建立高血粘滞征引起肺出血的动物模型;吴春英等[18]用肾上腺素皮下注射法,模拟临床先天性心脏病,超量输液致严重肺血管充血,建立幼龄大鼠肺出血模型;杜悦等[19]用内毒素腹腔注射建立感染引起肺出血的动物模型等。

4 胃出血模型

胃损伤、溃疡是导致胃出血的常见原因。夏勇等[20]认为胃损伤模型中以化学性、物理性损伤较常见。化学性胃损伤模型包括非甾体抗炎药物引起的胃损伤、氰酸甲苯酯引起的胃损伤、尼古丁引起的胃损伤、幽门螺杆菌(HP) 引起的胃损伤、冰乙酸引起的胃损伤、酒精引起的胃损伤等。物理性胃损伤模型包括缺血再灌注引起胃损伤、枪弹噪声引起胃损伤、冷拘束引起胃损伤等。王凌娟等[21]认为幽门结扎性溃疡方法可靠,重复性好,省时;药物诱发型溃疡常选用的药物如阿司匹林、地塞米松、强的松、消炎痛等,对胃粘膜有刺激作用,可加重胃溃疡的病情;乙酸性溃疡方法可靠,重复性好,溃疡深而大,与人类的慢性胃溃疡极为相似。

吴润秋等[22]用消炎痛加乙醇法建立小鼠胃出血模型;用附子、干姜、肉桂、党参、黄芪、辣椒各100g建立热盛模型。王晓聆等[23]将杂种犬麻醉后,将内窥镜插入胃肠部,并用活检组织钳在胃、肠道内造成几处出血病灶形成一个创伤面,建立胃大出血动物模型。

陈易新等[24]通过对脾不统血证中脾气虚状态与出血因素关系的研究,认为劳倦泻下同时施加出血因素是比较合理的脾不统血证动物模型的塑造方法。黄雪琪等[25]采用番泻叶、水蛭辅以建立脾不统血模型。陈艳芬等[26]分别采用无水乙醇或辣椒+乙醇给大鼠灌胃造成胃热Ⅰ°和胃热Ⅱ°模型,采用NaOH或冰水+NaOH造成胃寒Ⅰ°和胃寒Ⅱ°模型,并认为建立的寒、热型胃黏膜损伤病证结合模型从理论和方法学上可行,可用于评价相应中药和方剂的药效。武永忠等[27]用硫代乙酰胺诱导大鼠慢性肝损害肝硬变及门脉高压,继用饥饿诱导法使大鼠发生门脉高压性胃粘膜出血,并观察到随着饥饿持续时间延长,模型鼠出血率及严重性分级均明显增加。刘巨源等[28]用幽门结扎法、水浸应激性法、乙酸烧灼法建立大鼠胃溃疡模型,用利血平法建立小鼠胃溃疡模型。

5 胰腺出血模型

急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)实验动物模型的建立方法主要有[29]:经十二指肠或胰尾胰管灌注、十二指肠荷包缝合及胰实质内注射。其中,经十二指肠乳头或胰尾胰管灌注技术要求条件高,首次插管失败,造成十二指肠乳头水肿或胰尾出血水肿,再次插管成功率低。而十二指肠荷包缝合在形成AHNP的过程中,容易导致动物死亡,不利于观察。

薛建国等[30]对传统的方法进行了改进,设计了在胰腺被膜下均匀注射50g/L牛磺胆酸钠制备AHNP模型的方法。据认为胰腺被膜下均匀注射法,方法简单,可快速建立AHNP动物模型,是值得推广并可短期内大批复制的可靠模型。

活体胰腺炎(AP)模型包括[31]:乙硫氨酸饮食法、胰管结扎法、蛙皮素注射法、胰管注射法、动脉注射微球法、胰腺均匀注射法、高钙血症法、免疫法和电针刺激法等;离体胰腺炎模型包括:游离胰腺灌注法[32,33]和高钙血症离体研究方法等[34]。

6 子宫出血模型

王晓东等[35]用米非司酮配伍米索前列醇灌胃致早孕大鼠不全流产建立子宫出血模型。方法:将大鼠♀♂按2∶1 比例合笼,次日晨进行阴道涂片检查,以发现有精子为妊娠1天。于第七天分别灌胃米非司酮(8∶00)和米索前列醇(18∶00),同时于阴道内置入定量棉球一个(棉球用塑料薄膜包裹半侧,以防血液漏出和尿液反流)。次日分别于8∶00 和18∶00将棉球取出,放入塑料袋中密闭冷藏保存,同时置换一个新棉球于阴道内,观察阴道出血情况,连续至第14天,处死动物,观察子宫病理形态学变化,将收集的每鼠阴道棉球进行出血量测定。研究者认为该模型可作为药物终止早孕引起子宫出血防治研究的药效评价的实用模型。

尤昭玲等[36]选择月经正常的雌性育龄恒河猴,在月经第3天,用致病性细菌接种宫腔建立恒河猴子宫内膜炎性出血模型。研究者认为此模型对于深入研究子宫内膜炎性出血止血、内膜崩解、重塑修复的机制及研究其防治措施具有重要意义。

孟宪丽等[37]通过置含铜宫内节育器(IUD)建立家兔子宫异常出血模型。方法:将家兔麻醉后,固定四肢,去毛清洁皮肤后,打开盆腔,暴露子宫角,在右侧子宫距阴道3.5cm处作一直径2cm的切口,朝阴道方向插入改造后的IUD,并将其固定在子宫壁上,缝合切口。

7 结语

上述出血动物模型各有特点,研究者可根据需要,选择和建立适于出血病因学、药效学或形态学等方面研究的动物模型来观察和探讨出、止血各方面情况。通常可以根据止血药物的作用机制、作用时间和与人出血损伤相近程度等因素来考虑选择适合的出血模型。建议采用两种以上方法建立模型,从多个角度进行研究,这样才较全面。

参考文献:

[1] 陈彦克,陈衔城.自发性脑出血动物模型[J].国外医学•脑血管疾病分册,2004,12(8):576-578.

[2] 施新猷.现代医学实验动物学[M].北京:人民军医出版社,2000.

[3] 何刚,刘茂才.实验性脑出血动物模型的研究进展[J].国外医学•神经病学神经外科分册,2001,28(2):80-83.

[4] 曾锦旗,金益强,胡随瑜.出血性中风中经络动物模型的制作[J].湖南中医学院学报,1998,18(3):4-5.

[5] 戴如飞,刘宁,王东,等. 大鼠脑内囊出血模型的研究[J].南京医科大学学报(自然科学版),2003,23(6):619-620.

[6] 于海洲,李昌盛,刘相轸.兔蛛网膜下腔出血模型方法改进[J].临床荟萃,2001,16(11):509-510.

[7] 朱庆,刘艳霞,李刚,等.改良大鼠蛛网膜下腔出血模型[J].中国药理学通报,2006,22 (9):1144-1146.

[8] 种兆忠,冯亦璞.一个简单易行的大鼠蛛网膜下腔出血模型的建立[ J ].中国药理学通报,1998,14 (2): 185-186.

[9] 季鹰,吴建中. 一种新的蛛网膜下腔出血(SAH)动物模型的建立[ J ].中华神经外科杂志,1991,7 (1): 11-13.

[10] 高成,陈会荣,刘相轸,等.三种方法制作大鼠蛛网膜下腔出血模型[J].中国微侵袭神经外科杂志(CMINSJ),2008,13(9):409-411.

[11] 卫煊,杨冠,戴友林,等.激光在医学中的应用[M].北京:科学出版社,1974.

[12] 李晟,梁凤鸣,王明芳,等.FD-Nd:YAG 532激光制作眼内出血模型的体会[J].中国中医眼科杂志,2000,10(1):10-11.

[13] 钱秋海,夏丽英,赵懿,等. 糖视清对家兔眼内出血模型的视网膜和家兔高血糖模型的眼球结膜微循环的影响[J].中国临床药理学杂志,2008,24(5):426-429.

[14] 姚芳蔚,刘红娣,钟立贤,等.眼内出血动物模型[J].中西医结合眼科,1983.

[15] 司徒勋,陈克正.外源性五羟色胺大鼠肺出血模型及其与浓度关系[J].现代临床医学生物工程学杂志,2004,10(3):197-202.

[16] 陈克正,王卫新生大鼠肺出血动物模型的建立及对临床的启示[J].中国当代儿科杂志,2002(4):357-360.

[17] 李娟,李书琴,吴红敏,等.肺出血幼兔右心室压力及肺毛细血管内皮细胞超微结构的改变[J].中华儿科杂志,2000,38:147-149.

[18] 吴春英,鲁建生,舒涛.幼龄大鼠弥漫性肺出血模型的建立[J].实验动物与比较医学,2005,25(3):147-150.

[19] 杜悦,吴玉斌,蔡栩栩,等.内毒素致新生大鼠肺组织PELAM-1,T-PA,PAI-1表达的改变及其意义[J].中华儿科杂志,2004,42:649-653.

[20] 夏勇,吴惠岭,傅剑云,等.建立胃损伤模型的方法及选择[J].实用预防医学,2005,12(3):659-661.

[21] 王凌娟,张雯.胃溃疡及实验性胃溃疡模型[J].中国烧伤创疡杂志,2000(2).

[22] 吴润秋,唐红波,郭建生.复方胃热康对热盛胃出血模型止血作用的影响[J].中国中医药信息杂志,2004,11(4):306-307.

[23] 王晓聆,顾晓萌,唐建民.氩离子激光对动物胃肠道粘膜出血的止血研究[J].激光杂志,2000,21(2):69-70.

[24] 陈易新,陈家旭,季绍良,等.脾不统血证中脾气虚状态与出血因素关系的研究[J].中医药研究,2001,17(1):38-40.

[25] 黄雪琪,陈家旭,林海,等.益气止血方对脾不统血证动物模型的治疗作用[J].北京中医药大学学报,2004,27(3):40-42.

[26] 陈艳芬,陈蔚文,李茹柳.大鼠寒热型胃粘膜损伤模型的研究[J].中药药理与临床,2002,18 (2):44-46.

[27] 武永忠,何泽生,吴金生,等.饥饿对门脉高压性胃粘膜出血的影响[J].华人消化杂志,1998,6(9):747-748.

[28] 刘巨源,刘春霞,张小毅,等.溃疡散对实验性胃溃疡的保护作用及机制[J].河南中医,2001,21(2):24-26.

[29] 赵慧业,肖国衡,熊启达,等.胰实质内注射牛黄胆酸钠引起实验性大鼠急性出血性胰腺炎模型及其早期损害的研究[J].中国病理生理杂志,1986,2(2):112.

[30] 薛建国,王宇,许元弟.建立大鼠急性出血坏死性胰腺炎模型方法的改进[J].中华实验外科杂志,1994,11(5):313-313.

[31] 李春艳,崔美芝,成晓松.急性胰腺炎动物模型概况[J].哈尔滨医科大学学报,1998,32(4):308-310.

[32] 姜永锋.急性胰腺炎的实验研究进展[J].国外医学•外科学分册,1996,23(1):13

[33] 张延龄.急性胰腺炎的实验模型[J].国外医学:外科学分册,1995(2):68.

[34] 马桂华.现代实验动物学[M].哈尔滨: 黑龙江科技出版社,1996.

[35] 王晓东,赵军宁,张白嘉,等.药物致早孕大鼠子宫出血模型的建立[J].中国药理学通报,1999,15(2):182-184.

[36] 尤昭玲,马红霞,陈俊明,等.恒河猴子宫内膜炎性出血模型的建立[J].中国比较医学杂志,2003,13(5):310-312.

[37] 孟宪丽,陈钢,薛红,等.柴胡止血液对家兔置含铜宫内节育器所致出血的作用及机理研究[J].中药药理与临床,2000,16(4):32-33.

(责任编辑:陈涌涛)

Some Usual Experimental Model of Hemorrhage

Lou Caixia, Cui Jian*

(Minzu University of China, Research Institution of Chinese Minority Traditional Medicine, Beijing 100081)

Abstract:We analyze reference of experimental model of hemorrhage of the past ten years. Experimental model of hemorrhage are summarized in cases of cerebral, subconjunctival, pulmonary, gastrointestinal, pancreatic, uterine hemorrhage. This paper provides foundation for experimental research of hemostatic.

Key words:position of hemorrhage;animal model;method

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